KLF6在口腔癌细胞恶性生长中作用机制实验研究.docVIP

KLF6在口腔癌细胞恶性生长中作用机制实验研究 　　[摘要]　目的　探讨KLF6在口腔癌细胞恶性生长中的作用机制。　方法　应用免疫组化法检测95例口腔鳞癌组织和95例正常口腔黏膜组织中KLF6、p21和cyclin　D1的表达。　结果　KLF6、p21，和cyclin　D1在口腔鳞癌与正常口腔黏膜组织之间的差异均有统计学意义（P　　0.05）；KLF6　与p21的表达存在正相关，与cyclin　D1表达存在负相关（P　　0.05）。　结论　KLF6基因在口腔鳞癌的发生起着作用，KLF6与组织分化的关系提示浆表达的KLF6可用于判定肿瘤患者预后，而p21和cyclin　D1可能是作用的两个靶点。 　　[关键词]　KLF6；口腔癌细胞；作用机制；实验研究 　　[中图分类号]　R78 [文献标识码]　A [文章编号]　1674-4721（2012）12（a）-0092-02 　　在世界范围，口腔鳞状细胞癌（OSCC）为一种常见的口腔癌[1]，尽管医疗技术取得了巨大进步，但口腔癌的预后仍然不够理想。最近研究表明，癌发病的过程包括细胞增殖加速，细胞凋亡减弱，凋亡失败等。KLF6是普遍表达的锌指转录因子，它与生长发育、细胞分化及生长相关的细胞信号转导，细胞增殖、凋亡、血管生成等都有关。本文旨在研究KLF6是否与口腔癌的发生相关，并探究其与p21和cyclin　D1蛋白的关系。 　　1　资料与方法 　　1.1　一般资料 　　从本院2009年12月～2012年4月口腔鳞状细胞癌患者中，随机选95例作研究组，男65例，女30例，年龄37～75岁，平均52.8岁；术前均未经任何放、化疗等治疗；其中，舌39例，口底27例，牙龈9例，颊13例，硬腭7例；临床分期：Ⅰ期39例，Ⅱ期27例，Ⅲ期15例，Ⅳ期14例；颈淋巴结转移者32例，无颈淋巴结转移者63例。取每例标本肿瘤边缘5　mm外的癌旁正常口腔黏膜95例（均未见肿瘤组织）为对照，其中，舌39例，口底27例，牙龈9例，颊13例，硬腭7例。 　　1.2　实验方法 　　1.2.1　主要试剂与染色方法 兔抗人cyclin　D1单克隆抗体购于福州迈新生物技术有限公司，鼠抗人p21蛋白单克隆抗体，多克隆兔抗KLF6均购自Santa　Cruz公司。以上病理组织标本均经甲醛溶液固定、石蜡包埋，制成4　μm厚切片。进行免疫组织染色，以PBS替代一抗作为阴性对照。 　　1.2.2　结果判断 在高倍镜下对着色反应作如下评分：无着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；阳性范围：5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～100%为3分；两项结果相加，0～1分为阴性（-）、2～7分为阳性（+）。 　　1.3　统计学方法 　　应用SPSS　17.0统计软件，计量资料采用t检验，计数资料采用卡方检验，以P　＜　0.05为差异有统计学意义。 　　2　结果 　　2.1　KLF6、p21、cyclin　D1在口腔癌组与对照组的表达 　　KLF6蛋白在细胞核和细胞浆均有呈黄色或棕色表达；p21及cyclin　D1蛋白主要在细胞核呈现黄色或棕色表达，cyclin　D1在口腔癌组的阳性表达显著高于对照组（P　　0.05），而KLF6、p21在对照组的阳性表达高于口腔癌组（P　　0.05），见表1。 　　2.2　KLF6，p21，cyclin　D1与口腔鳞癌临床病理学关系 　　KLF6在不同组织分化组差异有统计学意义（P　　0.05）；p21在不同组织分化组表达差异有统计学意义（P　　0.05）。cyclin　D1在不同淋巴结转移组，临床分期组的差异有统计学意义（P　　0.05），见表2。 　　2.3　KLF6、p21、cyclin　D1三者表达的相关性 　　KLF6与p21的表达存在正相关，与cyclin　D1表达存在负相关（P　　0.05），见表3。 　　3　讨论 　　研究发现大多数肿瘤细胞都存在一些细胞周期调控因子的表达异常，哺乳动物细胞分裂及分化的主要调节事件发生在G1期，G1期周期蛋白异常表达可能导致细胞周期失调，导致肿瘤的发生[2]。 　　p21属于细胞周期依赖激酶抑制物，主要通过阻止视网膜母细胞瘤（Rb）基因的磷酸化来调节转录因子E2F的活性。当Rb基因处于磷酸化状态时，调节细胞周期进展的一些关键基因的转录不可以被E2F激活。以此，p21阻止了G1期向S期的过渡，将细胞周期阻滞在G1～S期，从而抑制细胞的生长。蔡杨等[3]推测p21基因失活是口腔癌发生过程中的早期分子事件。cyclin　D1也被认为是在细胞周期蛋白家族中限制G1期向S期转化中重要的调控因子之一。该基因的扩增、染色体重排或转录后调节都可导致其蛋白的过表达而发生癌变，cyclin　D1的N端的序