Cyr61在增生性瘢痕及正常皮肤中差异表达和意义.docVIP

Cyr61在增生性瘢痕及正常皮肤中差异表达和意义 　　[摘要] 目的 探讨Cyr61在增生性瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中表达差异及其意义。方法 取自愿捐献的增生性瘢痕及正常皮肤标本，采用组织块法进行原代成纤维细胞培养。采用实时定量PCR法及细胞免疫荧光法检测Cyr61在两种细胞中的表达。结果 在mRNA水平及蛋白水平上，Cyr61在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达均高于正常皮肤成纤维细胞。结论 Cyr61在增生性瘢痕形成过程中可能存在一定的作用，可能通过调节胶原代谢以及调节成纤维细胞增殖影响增生性瘢痕的形成。 　　[关键词] Cyr61；增生性瘢痕；成纤维细胞；创面愈合 　　[中图分类号] R622 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）30-0037-04 　　[Abstract] Objective To observe the differential expression and significance of Cyr61 in hypertrophic scar and normal skin fibroblasts， and to explore its significance. Methods The hypertrophic scar and normal skin specimens voluntarily donated were taken. Primary fibroblasts were cultured using tissue block method. The expression of Cyr61 in two kinds of cells was detected by real-time quantitative PCR and immunofluorescence. Results The expression of Cyr61 in hypertrophic scar fibroblasts was higher than that in normal skin fibroblasts at mRNA level and protein level. Conclusion Cyr61 may have a role in the formation of hypertrophic scars， which may affect the formation of hypertrophic scars by regulating collagen metabolism and regulating fibroblast proliferation. 　　[Key words] Cyr61； Hypertrophic scar； Fibroblasts； Wound healing 　　增生性瘢痕是以成纤维细胞过度增殖分化以及细胞外基质（extracellular matrix， ECM）过度沉积为特征的皮肤纤维化疾病，探索皮肤过度纤维化的机制以及控制纤维化进程成为防治增生性瘢痕的焦点。Cyr61属于CNN家族的一员，是一种分泌性的基质细胞蛋白。目前多数研究认为Cyr61在内皮细胞及皮肤成纤维细胞中参与细胞的粘附、迁移以及细胞外基质的合成[1-3]。在创面的愈合过程中，Cyr61在成纤维细胞中呈现动态的表达，并可通过诱导成纤维细胞衰老产生抗纤维化作用[4]。本研究采用realtime-PCR、细胞免疫荧光以及WesternBlot技术，检测Cyr61在增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞中mRNA及蛋白表达情况，以探讨其与增生性瘢痕发生的关系。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂与仪器 　　DMEM培养基（美国Gibco公司），胎牛血清（杭州四季青公司），胰蛋白酶（美国Gibco公司），Dispase（日本Sanko公司），兔抗人CYR61多克隆抗体（美国Abcam公司），Trizol（美国Invitrogen公司），SYBR Green PCR试剂盒（上海达为科生物科技公司），Real-timePCR检测仪（美国ABI公司），低温冷冻离心机（美国Sigma公司），激光共聚焦显微镜（日本OLMPUS公司）。 　　1.2 标本来源 　　增生性瘢痕组织分别来自我院3例临床瘢痕增生患者，其中男2例，女1例，年龄15、16、20岁，标本分别取自于大腿外侧2例及前臂1例，瘢痕生长时间不超过1年。正常皮肤组织分别取自正常人群大腿2例和上臂1例，年龄16、18、21岁，男2例，女1例。 　　1.3 细胞培养 　　无菌条件下，用PBS液冲洗组织块3遍，剪弃脂肪和结缔组织。用刀片割成1～2 mm宽的小皮条，置于培养皿中，加入2.0 U/mL的Dispas