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microRNA―21逆向调控RECK促进乳腺癌细胞侵袭转移研究 　　【摘要】 目的 研究 microRNA-21参与乳腺癌侵袭转移的调控机制。方法 采用实时定量反转录 -聚合酶反应 （RT-PCR）方法检测MDA-435、MDA-231和 MCF-7乳腺癌细胞株 microRNA-21的表达；采用 transwell方法测定上述三株乳腺癌细胞体外侵袭转移能力；人工合成 microRNA-21干扰序列 ， 转染MDA-231、MDA-435乳腺癌细胞 ， 观察对细胞侵袭能力的影响；应用 Western blot检测逆转诱导蛋白（RECK）的表达；采用荧光报告基因实验检测 RECK与 microRNA-21的结合情况。结果 MCF-7、MDA-231及 MDA-435细胞株中均具有 microRNA-21高表达 ， 且表达量 MDA-435MDA-231MCF-7， 其中 ， 具有高侵袭特性的 MDA-435细胞具有最高水平 microRNA-21的表达为 （4.51±0.71）， MDA-231细胞具有中等水平的 microRNA-21表达为 （2.67±0.27）， MCF-7细胞表达microRNA-21水平相对较低为 （1.23±0.11）， 比较差异有统计学意义（P0.01）。三株细胞中 ， MDA-435细胞侵袭力最高为（425.4±35.0）细胞数/视野 ， MCF-7最低为（142.7±13.4）细胞数/视野 ， MDA-231居中为（263.7±24.4）细胞数/视野 ， 三组细胞侵袭力比较差异有统计学意义（P0.01）。将 anti-microRNA-21分别转染入 MDA-231和 MDA-435细胞 ， 与对照组比较 ， 两种细胞株转染 anti-microRNA-21后分别引起 56%和 67%的 microRNA-21表达量降低 ， 比较差异有统计学意义（P0.05）。将anti-microRNA-21转染入MDA-231细胞， 与阴性对照组比较 ， anti-microRNA-21引起了 34%细胞侵袭数目的减少。将 anti-microRNA-21转染入 MDA-435细胞 ， 结果表明 anti-microRNA-21引起68%侵袭细胞数目的下降。Western blot检测显示 ， microRNA-21表达下调， MDA-435细胞中 RECK表达明显增强；荧光素酶实验显示共转染 RECK和 anti-microRNA-21的 MDA-435细胞荧光酶活性增加38%。结论 本研究提示 microRNA-21可促进乳腺癌侵袭转移 ， 其作用可能与逆向调控 RECK有关。 　　【关键词】 乳腺癌；侵袭；microRNA-21；伴 Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白；RNA干扰 　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.195 　　【Abstract】 Objective To research regulation mechanism of microRNA-21 for breast cancer invasion and metastasis. Methods Real-time quantification polymerase chain reaction （RT-PCR） was applied to detect miR-21 expression in MDA-435， MDA-231 and MCF-7 breast cancer strains. In vitro invasion and metastasis of these three strains were detected by transwell method. Transfection on MDA-231 and MDA-435 cell was made by synthetic microRNA 21 interference sequence to observe the influence on cell invasion. Reversion-inducing cysteine-richprotein with Kazalmotifs （RECK） protein expression was detected by Western blot， and combination of RECK and microRNA-21 was detected by luciferase reporter gene test. Results All MCF-7， MDA-231 and MDA-435 strains had high expressed m