Exendin4通过抗氧化应激减轻糖尿病心肌病心肌纤维化实验研究.docVIP

Exendin4通过抗氧化应激减轻糖尿病心肌病心肌纤维化实验研究 　　摘要:目的 探讨Exendin4对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌纤维化的作用。方法 高热量饮食加小剂量链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型。成模大鼠随机分为糖尿病心肌病组(DCM组)和大、小剂量Exendin4干预组（DI组）,另设正常对照组(NC组)。治疗6周后测各组血脂、免疫组化法检测心肌血红素加氧酶1（HO1）、基质金属蛋白酶9（MMP9）的表达、Masson染色测心肌胶原含量。结果 与NC组相比,DCM组HO1的表达甚少,DCM大鼠MMP9的表达明显升高,心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维化,Exendin4治疗后,HO1的表达增强,MMP9表达减少，心肌纤维化减轻。结论 Exendin4通过抗氧化应激在逆转DCM心肌纤维化过程中起着重要的作用。 　　关键词:心肌纤维化；糖尿病心肌病；Exendin4；氧化应激 　　中图分类号：R587.1 R255.4 文献标识码：A 文章编号2012 　　 　　糖尿病心肌病(DCM)是一种特异性心肌病,病理表现为心肌肥厚和心肌纤维化,其发病机制尚未完全明了,研究表明高血糖导致活性氧代谢产物（ROS）的增多、氧化应激增强激活基质金属蛋白酶(MMPs)，进而引起心肌纤维化在其发病过程中起着关键作用［1,2］??。Hisko等［3］??指出, 胰高血糖素样肽1（GLP1）能够通过激酶A（PKA）的激活减少活性氧的产生。Exendin4是一种从蜥蜴毒液中分离出的含39个氨基酸的多肽。研究表明,在哺乳动物体内Exendin4与GLP1有相同的生理功能。本研究观察Exendin4能否改善糖尿病心肌纤维化,以及这种效应是否通过抗氧化应激实现。 　　1 资料与方法 　　1.1 实验动物 38只清洁Wistar雄性大鼠,6周龄,体质量180 g～220 g,自由进食、水。 　　1.2 大鼠DCM模型的建立 随机选取8只作为正常对照组（NC组）给予常规饲料,其余30只给予高糖高脂饲料(10%猪油、20%蔗糖、2%胆固醇、1%胆盐、67%常规饲料),4周后腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ， Sigma公司,溶于0.1 mol/L,pH4.2的枸橼酸缓冲液中)。对照组仅腹腔内注射等量的枸橼酸缓冲液。2周后血糖≥16.7 mmol/L的大鼠为糖尿病模型。26只大鼠符合2型糖尿病标准,随机分为Exendin4低剂量组(8只)、Exendin4高剂量组(8只)、DCM组（10只)、Exendin4低剂量组、Exendin4高剂量组分别给予Exendin4 4 μg/kg、20 μg/kg每日皮下注射,治疗6周。DCM组仅给予高脂高糖饲料。 　　1.3 血标本的获取及观察指标 实验结束时以20%乌拉坦溶液4 mL/kg腹腔注射麻醉,剖杀大鼠,心房内取血,离心分离血清,检测胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)。 　　1.4 组织标本的制备及观察指标 迅速取出心脏,在冰盐水中冲洗干净,滤纸吸去多余水分。在左心室中部留取小块组织,放入100 g/L中性甲醛液内,24 h后石蜡包埋。免疫组织化学分析采用SP染色试剂盒,所用抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。石蜡切片常规脱蜡至水,30 g/L过氧化氢孵育10 min消除内源性过氧化物酶的活性,蒸馏水冲洗,PBS浸泡 5 min,高压热修复抗原,按试剂盒所介绍的方法分别检测基质金属蛋白酶9（MMP9）、血红素加氧酶1（HO1）的表达情况,使用高清晰度彩色医学图文分析系统的灰度定量法进行半定量分析。 　　1.5 HE、Masson染色 取少许左心室肌组织石蜡切片,行HE、Masson染色,光镜下观察心肌细胞呈红色,胶原纤维呈蓝绿色,拍片,采用图像分析仪定量心肌组织胶原的含量。 　　1.6 统计学处理 采用 SPSS13.0行Oneway ANOVA方差分析。 　　2 结 果 　　2.1 一般状况 糖尿病大鼠多食、多饮、体质量明显减轻,血糖水平升高,符合2型糖尿病的诊断标准;DCM组有2只大鼠死亡,可能死于感染或糖尿病并发症。 　　2.2 血脂指标比较 低剂量组和高剂量组均导致三酰甘油和低密度脂蛋白的降低,二者降低水平差异有统计学意义(P0.05)。详见表1。 　　2.3 大鼠心肌HO1、MMP9的表达水平 与NC组相比,DCM组HO1的表达甚少,治疗后表达明显增加,大剂量组较显著; DCM大鼠MMP9的表达明显升高,心肌组织胶原含量明显升高,心肌间质纤维化,Exendin4治疗后,MMP9表达减少，心肌纤维化减轻,大剂量治疗组较显著。详见表 2。 　　2.4 心脏病理变化 HE