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T细胞酶联免疫斑点试验在结核病诊断中应用 　　【摘要】 目的：探讨结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）在结核病快速诊断的临床应用价值。方法：选取74例结核病患者（疾病组）和48例非结核病（对照组）对照，同时采用结核杆菌涂片、结核抗体（TB-Ab）、结核菌素试验（TB-PPD）及结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）进行检测，并比较四种检测方法对结核病的诊断价值。结果：T-SPOT.TB法的敏感性为75.68%、特异性为91.67%、阳性预测值为93.33%、阴性预测值为70.97%，均明显高于TB-PPD法的55.41%、56.25%、66.13%、45.00%和TB-Ab法的36.49%、68.75%、64.29%、41.25%，涂片染色镜检阳性率仅为9.46%。结论：T-SPOT.TB是诊断结核感染的快速、敏感的方法，在结核性疾病早期诊断中有重要价值。 　　【关键词】 结核杆菌涂片； 结核抗体； 结核菌素试验； T细胞酶联免疫斑点试验； 结核病 　　中图分类号 R446.6 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）30-0057-02 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.30.028 　　我国是全球结核高疫情国家之一，年新发病例超过100万人，以肺结核为主，肺外结核约占15%～20%[1]。目前结核病的诊断主要依靠临床症状、影像学、痰涂片、痰分枝杆菌培养和结核菌素（PPD）试验等，阳性率与特异性均较低，临床上易造成漏诊和误诊，肺外结核更为明显，结核分枝杆菌培养阳性是结核诊断的金标准，但分枝杆菌培养时间太长（6～8周）[2]。江苏省已广泛接种卡介苗（BCG），与结核菌素试验所用的结核杆菌纯化蛋白衍生物（PPD）有交叉反应，会出现较高的假阳性，部分老年人或免疫功能低下患者又会出现较高的假阴性率，影响患者的诊断和治疗。因此笔者所在医院引进近年发展起来的结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB），为临床早期发现结核病提供帮助。本文采用回顾性分析的方法，探讨结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）在结核病快速诊断的临床应用价值。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集2014年1-12月笔者所在医院住院和门诊的结核病患者74例为疾病组，男43例，女31例，年龄21～88岁；其中肺结核48例，肺外结核26例（结核性胸膜炎20例，肾结核2例，结核性淋巴结炎4例）；所有患者均经病原学、组织病理学、影像学等实验室检查和/或诊断性抗结核治疗有效等方法结合临床最终确诊。非结核病48例为对照组，男24例，女24例，年龄30～92岁；其中细菌性肺炎35例，泌尿系统结石5例，肺癌8例。两组均实施（结核杆菌）涂片、结核抗体（TB-Ab）、结核菌素试验（TB-PPD）和结核感染T细胞酶联免疫斑点试验（T-SPOT.TB）检测。两组患者一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 T-SPOT.TB检测 　　1.2.1.1 T-SPOT.TB检测试剂盒由英国Oxford Immunote公司生产，由上海复星长征医学科技有限公司提供。 　　1.2.1.2 采集肝素锂抗凝患者外周血5 ml，室温保存，按操作程序分离外周血单个核细胞（PBMC），稀释成2.5×106个细胞/ml的工作液，在已预先包被IFN-γ抗体的微孔板中分别加入细胞培养液作为阴性对照，植物血凝素（PHA）作为阳性对照，结核分枝杆菌特异性混合多肽-早期分泌靶向抗原（ESAT-6）作为抗原A和培养滤液蛋白10（CFP-10）作为抗原B，各50 μl为检测孔，然后再在各孔中加入100 μl已配好的单个核细胞工作液37 ℃5%CO2培养16～20 h，洗板后加入酶标记鼠抗人IFN-γ单克隆抗体，2 ℃～8 ℃孵育1 h，洗板后加底物显色，根据试剂说明书进行阅读并统计。 　　1.2.1.3 T-SPOT.TB结果判定严格按照说明进行，当阴性对照孔斑点数为0～5个且测试孔斑点数减去阴性对照孔斑点数≥6个或阴性对照孔斑点数6～10个且测试孔斑点数≥2倍的阴性孔对照数为阳性，阳性对照孔斑点数20个视为实验有效，阴性对照孔斑点数10个视为结果无法判读，必须重新检测，如阳性对照正常而检测孔斑点数达不到阳性标准则判为阴性[3]。 　　1.2.2 TB-PPD试验 按《全国结核病防治工作手册》标准操作和判断结果。 　　1.2.3 TB-Ab检测 试剂盒由天津中新科炬生物制药有限公司提供，胶体金方法。 　　1.2.4 痰漂浮集菌涂片法 严格按照《全国临床检验操作规程》第3版介绍方法操作和判读。 　　1.3 统计学处理 　　采用