COX2在乳腺癌组织中超微结构定位及其意义.docVIP

COX2在乳腺癌组织中超微结构定位及其意义 　　[摘要] 目的:观察COX-2蛋白在乳腺癌组织中的超微结构定位及其意义。方法:采用胶体金标记免疫电镜方法检测22例乳腺癌组织标本,观察COX-2蛋白在乳腺癌组织中的定位。结果:胶体金标记免疫电镜显示,59.1%的乳腺癌组织中存在黑色、圆形、集中的胶体金颗粒。结论:COX-2蛋白超微结构定位于乳腺癌细胞的内质网与核膜上,可能与乳腺癌形成过程中蛋白质的合成和转运有关。 　　[关键词] 乳腺癌;COX-2;超微结构;免疫电镜 　　[中图分类号] R737.9 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210(2010)04(a)-035-02 　　 　　Location of ultrastructure and significance of COX-2 in breast cancer tissue 　　LI Yuanyuan, LIU Yuqing*, WU Hongjuan 　　(Weifang Medical College, Weifang 261053, China) 　　[Abstract] Objective: To observe the location of ultrastructure and significance of COX-2 protein in breast cancer tissue. Methods: We used immuno-electronmicroscopy method to detect the expression of COX-2 protein in 22 cases of breast cancer tissue, and the location of COX-2 protein was observed. Results: Immuno-electronmicroscopy showed that 59.1% of breast cancer existed in black, round, concentrated colloidal gold particles, COX-2 granules existed in endoplasmic reticulum and nuclear membrane. Conclusion: COX-2 protein exists in endoplasmic reticulum and nuclear membrane of breast cancer tissue, it may be related to breast cancer during the formation of protein synthesis and transport. 　　[Key words] Breast cancer; COX-2; Ultrastructure; Immune electron microscopy 　　 　　乳腺癌是严重危害世界女性健康的恶性肿瘤,其发病率不断上升,发病年龄日趋年轻,已引起人们的高度重视。环氧合酶-2(COX-2)属环氧合酶系,是花生四烯酸合成前列腺素过程中的重要限速酶。近年来,随着对COX-2认识的不断深入,发现乳腺癌组织中存在COX-2的表达,且COX-2的表达与乳腺癌的发生及发展密切相关[1]。因此,COX-2成为目前乳腺癌防治的研究热点,找出COX-2蛋白在乳腺癌组织中的超微结构定位,对于指导临床治疗乳腺癌具有重要意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂 　　兔抗人COX-2单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司;胶体金标记的羊抗兔IgG购自北京博奥森生物技术有限公司。 　　1.2 免疫电镜检测 　　离体0.5 h内新鲜乳腺癌标本22例,立即置于含饱和苦味酸的多聚甲醛溶液中固定4～6 h,而后以0.1% PBS反复漂洗,再以20%蔗糖沉淀。振荡切片机切片,载于200～300目的镍网上。染色步骤:将切片置于1% H2O2液滴上10 min,双蒸水喷洗,正常羊血清(1∶20稀释)封闭,TBS洗涤,用滤纸吸干网缘水分,滴加COX-2抗体,4℃冰箱孵育过夜。以TBS代替一抗为阴性对照,冰箱中取出蜡板复温30 min,TBS洗涤、喷洗,滴加胶体金标记的羊抗兔IgG,TBS洗涤、喷洗,1%戊二醛室温固定,TBS洗涤、喷洗,双蒸水喷洗,醋酸铀-枸橼酸铅复染,透射电子显微镜观察结果。 　　2结果 　　透射电镜下可见,59.1%乳腺癌细胞的内质网与核膜上存在黑色、圆形、集中的胶体金颗粒,表明乳腺癌组织中存在COX-2蛋白的表达(图1)。以TBS代替一抗的阴性对照组未见COX-2阳性金颗粒。 　　 　　图1 乳腺癌细胞