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HIF1 和COX2 在糖尿病肾病中作用和机制 　　摘要：目的 探讨2型糖尿病肾病患者血浆中HIF1 和COX2水平的变化及其在2型糖尿病肾病中的作用机制。方法 收入45例2型糖尿病患者及37例年龄/性别匹配的健康志愿者，检测其血浆中HIF1 和COX2的表达水平。另外，建立2型糖尿病肾病的大鼠模型，其中正常组和对照组各15只，分别检测2型糖尿病肾病大鼠血液和肾脏中HIF1 和COX2的表达水平。结果 糖尿病患者血清水平HIF1 （75.58±7.84）ng/mL及COX2水平（53.59±8.60）pg/mL均显著高于对照组[HIF1 （1.59±0.27）ng/mL，COX2（1.71±0.61）pg/mL]（P0.05）；HIF1 和COX2之间存在正相关，差异有统计学意义（r=0.975，P0.05）。与正常对照组比较，糖尿病大鼠血、尿HIF1 和COX2水平均增高；Western blotting 结果显示，糖尿病大鼠肾病组织中HIF1 和COX2表达量明显上调。结论 2型糖尿病患者和糖尿病肾病的大鼠模型血清中HIF1 和COX2 表达量都明显上调，表明二者在糖尿病肾病的发生发展中都起着重要作用。 　　关键词：糖尿病肾脏病；低氧诱导因子；环氧合酶 　　糖尿病肾脏病（DKD）是糖尿病微血管的主要并发症，其发病机制迄今尚未完全阐明[1]，早期研究表明肾脏毛细血管间肾小球硬化造成蛋白尿排泄和滤过的异常引起病变[2]。近年的研究显示HIF1 及其下游蛋白COX2参与多种疾病的发生和发展，多项研究表明高表达的HIF1 及COX2参与了多种肿瘤形成过程中的新的血管生成[3，4]。而糖尿病肾脏病的产生也是由于血管发生病变引起，我们推测HIF1 及COX2也可以参与调节糖尿病肾脏病。本研究旨在通过检测2型糖尿病患者和糖尿病肾病的大鼠模型中HIF1 和COX2的表达情况，来探讨二者在糖尿病肾病中的作用及机制。 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1一般授试者 研究中共收入82例研究对象，45例为2型糖尿病（DM）患者，男24例，女21例，年龄50～79岁，平均年龄（64.55±10.30）岁；糖尿病的诊断标准参考1999年世界卫生组织制定的标准，即空腹血糖7.0mmol/L，餐后2h或糖耐量试验2h 1.lmmol/L。37例为健康志愿者，男19例，女18例，年龄48～78岁，平均年龄（62.22±11.18）岁。 　　1.1.2糖尿病肾病大鼠模型 清洁级近交系雄性Wister大鼠30只，每笼5只，饲养于标准环境，12h光照周期。随机分为糖尿病模型组和正常对照组，每组15只。糖尿病模型组给予单次左下腹腔注射60mg/kg的链尿佐菌素（STZ），注射后第3d测尾静脉血糖，若血糖低于11.1mmol/L者被排除；正常对照组腹腔注射等量的柠檬酸缓冲液，所有动物于8w处死。 　　1.2方法 　　1.2.1 标本处理 ①受试者在空腹12 h后于清晨采集外周静脉血5ml，加入肝素锂抗凝离心管中，4℃ 3000 r/min离心10 min，取上清液待检。②大鼠模型于实验第8w麻醉后剪断颈动脉取全血6～8ml，离心分离血清，待测各项指标。并处死动物，迅速取出肾脏，待检。处死前夜大鼠禁食过夜，自由饮水。 　　1.2.2检测方法 ①血液中COX-2检测采用Zymed公司提供的人COX2试剂盒进行酶联免疫吸附法（ELISA）检测，以ng/mL为浓度单位。VEGF检测同样采用（ELISA）测定，试剂盒由Raybiotech公司生产，严格按照试剂盒程序操作，以pg/mL为浓度单位，每份标本进行重复检测并取平均值作为分析数据。②Western Blot检测大鼠肾脏组织中HIF1 和COX2的表达量。BCA（碧云天公司）法测定各样品蛋白质含量，Western Blot分析结果，选用GAPDH做内参。其中HIF1 、COX2及GAPDH的抗体都来源于CST公司。 　　1.3 统计学分析 所有数据用均数±标准差表示（mean±SE），采用SPSS17. 0统计学软件进行分析。组间比较方法采用单因素方差分析，相关性分析行Pearson统计，相关系数用r表示。P0.05表示差异有统计学意义。 　　2结果 　　2.1 受试者一般资料比较 糖尿病组患者糖化血红蛋白、尿蛋白及血肌酐水平显著高于健康对照组，差异有统计学意义。见表1。 　　2.2 受试者血清中HIF1 和COX2表达水平变化比较 糖尿病组患者血清HIF1 和COX2水平均高于健康对照组，差异有统计学意义，HIF1 与COX2之间存在正相关，差异有统计学意义（r=0.963，P0.01），HIF1 及COX2与患者尿蛋白之间均存在正相关，差异有统计学意义（HIF1 与尿蛋白