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IGF1R抗体对兔耳瘢痕组织影响 　　作者：陶芸，赵亚南，王继华，张景波，肖鸿，刘红莉 　　[摘要]目的：观察胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)抗体对兔耳增生性瘢痕组织的影响。　方法：建立兔耳增生性瘢痕动物模型，21天后瘢痕局部注射不同浓度的IGF-1R抗体或生理盐水，连续7天，观察1个月。分别对瘢痕增生指数(hypertrophicindex，HI)、成纤维细胞数和胶原含量的变化进行比较。结果：一定剂量IGF-1R抗体组HI值、成纤维细胞数量以及胶原含量比对照组减少(ρ＜0．01或0．05)。　结论：IGF-1R抗体能抑制兔耳瘢痕组织增生。 　　[关键词]胰岛素样生长因子-1受体；增生性瘢痕；动物模型 　　[中图分类号]R619+．6 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455(2006)12―1334―03 　　[基金项目]云南省教育厅科学研究基金项目(04J876C) 　　通讯作者：赵亚南，男，教授，主任医师，硕士研究生导师。 　　E-mail：yzha04@hotmail．com 　　 　　伤口愈合后期成纤维细胞增殖及合成、分泌旺盛，引起细胞外基质过度沉积导致增生性瘢痕的形成。生长因子持续刺激是创伤愈合后瘢痕增生的原因之一，胰岛素样生长因子-1(IGF-1)能促进细胞分化，又与成纤维细胞增殖、活跃程度密切相关，是影响创面愈合的重要因子之一。近年来研究发现，增生性瘢痕中大量表达IGF-1及其受体，并认为可能与瘢痕的形成密切相关。本研究即利用外伤性兔耳早期瘢痕增生模型，观察并研究IGF-1R抗体对增生性瘢痕组织的影响，初步探讨IGF-1及其受体与瘢痕增生的关系。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1试剂及仪器：IGF-IR抗体购自深圳晶美生物制品有限公司。XSB211型OLYMPUS光学显微镜、TD-2000真彩色病理显微图像分析系统和LEICA RM2145超薄切片机由昆明医学院重点实验室提供；LEICA DM 6000B病理图像分析仪由云南药物研究所提供。 　　1．2实验动物：健康日本大耳白兔20只，雌雄各半，体重 　　2．2～2．6kg，购自昆明医学院动物实验中心。 　　1．3实验方法 　　1．3．1动物模型的建立：兔适应性喂养72h，用3％戊巴比妥钠(1ml／kg)耳缘静脉注射麻醉。在兔双耳腹侧部分沿长轴避开可见血管，分别做6个直径1．0cm的圆形切口，切口间隔1．0cm，完整切除全层皮肤，去除软骨膜，用热金属丝点灼创缘皮肤，至轻微结痂，达到充分止血，术毕创面用无菌纱布包扎固定。每只兔12个创面，共240个创面。术后一周去痂，自然愈合。术后21天左右，约有90％的创面形成外观凸起的瘢痕组织，随机取样，病理证实为外伤性早期兔耳瘢痕增生。 　　1．3．2动物组别和处理：兔耳瘢痕模型制作成功后，随机将每只兔耳的8个瘢痕块分为4组：生理盐水溶剂对照组(A组)、IGF-1R Ab 1．5μg／ml剂量组(B组)、3．0μg／ml剂量组(C组)和6．0μg／ml剂量组(D组)，共20只兔，故A～D组各有瘢痕块40个。术后第21天，分别对各组瘢痕基底部及瘢痕灶内注射不同浓度的IGF-1R抗体或生理盐水，每日注射1次，持续7天，每次注射用量为20μl。 　　1．3．3标本取材及处理：用药后第3、7、11、20、30天，在同样的麻醉条件下切取瘢痕组织及周围正常组织标本于10％福尔马林固定，常规石蜡包埋切片，行苏木素一伊红染色(HE)和胶原染色(VG)。光镜下观察HE染色切片，用测微尺测出瘢痕最高点至耳软骨表面的垂直厚度(a)、瘢痕周边正常皮肤至耳软骨表面的垂直厚度(b)，测算出瘢痕增生指数(hypertrophic index，HI=a／b)。每张组织切片分别随机选5个不重叠视野(×200)，HE染色切片镜下目测计数成纤维细胞数、VG染色切片定量检测胶原面密度的变化。 　　1．3．4统计学处理：实验结果用x±s表示，采用SPSS11．5软件包做统计学分析。 　　 　　2　结果 　　 　　2．1形态学观察：兔耳腹侧形成创面后，伤口约13～16天愈合，上皮化时即能触到硬块，此硬块不断高于皮肤，21～23天时增生达到高峰，厚度约为兔耳腹面正常皮肤厚度的2-3倍，质硬，色红。实验末期生理盐水对照组瘢痕仍维持较明显的增生状态，充血明显呈紫红色，质硬；B～D组瘢痕均出现萎缩，表现为瘢痕体积减小，充血减轻，变平变软、色泽变浅，其中C、D组最为明显。 　　2．2组织学观察 　　2．2．1 HE染色切片：与正常的兔耳全层结构相比，生理盐水对照组和B-D组瘢痕组织均厚于正常组织，尤其生理盐水对照组，可厚达正常组织的3倍，表皮呈波浪状明显增厚。实验组软骨有明显的增生，炎性细胞较多，成