电喷雾质谱图谱.docVIP

电喷雾质谱图谱 对于通常的分子量来说，计算的都是组成分子各元素的平均分子量，即按该元素同位素的丰度构成比进行计算得到，但对于质谱来说，其给出的分子量应该是该分子所有组成元素的最高丰度同位素原子量之和。如氯为35，而不是35.5。 电喷雾质谱的多电荷特性使得对于一些大分子如蛋白质，核酸的质荷比测定限定在普通商用仪器的功能范围之内(m/z 2000),且这并不会增加在多电荷分子中的同位素质量区分所需要的质谱分辨率。 在蛋白质组学研究中，采用高分辨质谱可以直接确定离子的带电状态，如C12和C13的表观分离距离为0.1Da，则其所带电荷为10，因C12和C13之间正好相差1，如为0.05Da，则为20。 l选择一定质量的离子作为母体离子,进入碰撞室,室内充有靶子反应气体(碰撞气体：N2、He、Ar、Xe、CH4等)，发生离子-分子碰撞反应，从而产生子离子，再经MS2的分析器及接受器得到子离子质谱(product ion spectrun)。一般称做CID(collision-induced dissociation)谱，或者称为MS/MS谱。 l氮规则： l含偶数个氮原子的分子,其质量数是偶数,含奇数个氮原子的分子,其质量数是奇数。 l与高质量碎片离子有合理的质量差,凡质量差在3~8和10-14,21,25之间均不可能,则说明是碎片或杂质 高质量离子所显示的,在裂解中失去的中性碎片,如M-1,M-15,M-18,M-20,M-31.,意味着失H,CH3,H2O,HF,OCH3 l调节锥体电压(DP)可使离子源输出的离子数达最佳条件，它通常以[M+H]+或[M-H]-是否最佳来衡量。 l电喷雾与大气压化学电离的比较 l·电离机理： l电喷雾采用离子蒸发， l而APCI电离是高压放电,发生了质子转移而生成[M+H]+或[M-H]-离子。 l·样品流速：APCI源可从0.2到2 ml/min；而电喷雾源允许流量相对较小. l·断裂程度；APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化合物就足以使其分解. l·灵敏度：通常认为电喷雾有利于分析生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更适合于分析极性较小的化合物。 l·多电荷：APCI源不能生成一系列多电荷离子 l LC/MS接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液，含钠和钾的成分必须lmmol/l。含甲酸(或乙酸)2%。含三氟乙酸≤0.5%。含三乙胺l%。含醋酸铵10一5 mmol/l。 l送样前一定要摸好LC条件，能够基本分离，缓冲体系符合MS要求。 l认为LC/MS/MS不需要样品预处理的理解是片面的 l·防止固体小颗粒堵塞进样管道和喷嘴 l·获得最佳的分析结果. l从ESI电离的过程分析：从ESI电离的过程分析： l ESI电荷是在液滴的表面 l样品与杂质在液滴表面存在竞争 l不挥发物防碍带电液滴表面挥发 l带电离子进入气相 l大量杂质防碍带电样品离子进入气相状态 l大量杂质离子的存在增加电荷中和的可能 l正离子方式常出现如下离子： l-Na 22 Da.higher than M+H l-K 38 Da.higher than M+H l-Li 6Da.higher than M+H l-NH4 17 Da.higher than M+H l-ACN 40 Da.higher than M+H l2M+H,2M+Na等 l负离子方式常出现如下离子： l-TFA 114 Da.higher then M-H(113 and 227 background) l-Acetate 60 Da.higher then M-H l-Formic 46 Da.higher then M-H l-Cl 36 Da.higher than M-H lLC-MS中常见的本底离子 m/z 15-150,溶剂离子，[(H2O)nH+，n=3-112] m/z 102,H+乙腈+乙酸,C4H7NO2H+,102.0549 m/z 149,管路中邻苯二甲酸酯的酸酐,C8H4O3H+,149.0233 m/z 288,2mm离心管的产生的特征离子 m/z 279,管路中邻苯二甲酸二丁酯C16H22O4H+,279.1591 m/z 316,2mm离心管的产生的特征离子 m/z 384,瓶的光稳定剂产生的离子 m/z 391,管路中邻苯二甲酸二辛酯,C24H38O4H+,391.2843 m/z 538,乙酸+氧+铁(喷雾管),Fe3O(O2CCH3)6,537.8793 母离子扫描(PAR,Precursor) 母离子分析可用来鉴定和确认类型已知的化合物，尽管它们的母离子的质量可以不同，但在分裂过程中会生成共同的子离子，这种扫描功能在药物代谢研究中十分重要 中性丢失扫描(NEUTRAL LOSS) 中性丢失扫