三叶青提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡研究.docVIP

三叶青提取物诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的研究 　　[摘要] 目的 探讨三叶青提取物对体外培养的人宫颈癌Hela细胞诱导凋亡的作用。 方法 四氮噻唑蓝（MTT）法检测三叶青提取物对Hela细胞的抑制增殖作用及其时效、量效关系；倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果 随着三叶青提取物浓度升高，作用时间的延长，其对Hela细胞的增殖抑制率逐渐增强，与对照组比较有明显差异（P0.05），Hela细胞形态出现明显的凋亡特征性改变。 结论 三叶青提取物对人宫颈癌Hela 细胞具有明显的体外细胞毒作用，其毒性作用与药物的浓度和作用时间呈明显正相关。 　　[关键词] 三叶青；Hela细胞；诱导凋亡；MTT法 　　[中图分类号] R73-36； R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）23-0004-03 　　[Abstract] Objective To study the effect of extracts from tetrastigma hemsleyanum diels et gilg on the proliferation of human cervical cancer Hela cells. Methods MTT assay was used to determine the inhibitory rate of the extracts from tetrastigma hemsleyanum diels et gilg on the proliferation of HeLa cells. The morphology of cell apoptosis was observed by inverted microscope. Results The inhibition ratio of tumor cell was gradually increased with the longer extension time or the increase of dosages of the extracts from tetrastigma hemsleyanum diels et gilg the treatment groups was significant differentce（P0.05） compared with the control group. Under inverted microscope， the tumor cells showed a special phenomenon of cellular apoptosis. Conclusion The extracts of tetrastigma hemsleyanum diels et gilg has a significant toxicological effect on human cervical cancer Hela cells， which positively relates with its concentration and effect time. 　　[Key words] Tetrastigma hemsleyanum diels et gilg； Hela cells； Apoptosis-inducing； MTT assay 　　宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤， 发病率在女性恶性肿瘤中居第二位[1]。目前临床治疗使用的化疗药物多有较强的毒副作用和耐药性问题，从传统中药中寻找高效、低毒的抗肿瘤药物已成为抗肿瘤药物新药开发的热门课题[2]。三叶青是我国浙江、江西、广西等少部分地区独有的珍稀中药品种[3]，可用于治疗肝炎、风湿性关节炎及病毒性脑膜炎等多种疾病，也是抗肿瘤常用药物[4，5]。有研究发现三叶青总黄酮能显著地抑制肝癌、肺癌、结肠癌等多种肿瘤细胞的生长，且细胞有明显的凋亡特征性改变[6-9]。本研究主要探讨三叶青提取物对宫颈癌Hela细胞的体外细胞毒作用，为其临床应用于宫颈癌治疗提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器及试剂 　　MTT 购于Sigma公司；RPMI-1640培养液、胰蛋白酶、胎牛血清购于Gibco公司；HF/60W二氧化碳培养箱，由香港Hecnforce公司生产；OLYMPUS（IX50-S8F2）倒置显微镜，酶标仪（型号XMARK）由美国BIO-RAD生产。 　　1.2 三叶青提取物制备 　　三叶青药材购自宁波鄞州医药药材公司，称取三叶青药材1000 g，采用碱性稀醇浸提，酸化沉淀法[9]得三叶青提取物6.9 g。 　　1.3细胞株及细胞培养 　　人宫颈癌Hela细胞株购自上海中科院细胞生化所，接种于含10%胎