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(2)苏云金芽孢秆菌的一个DNA分子上有许多基因,获得抗虫基因常采用的方法是“鸟枪法”。具体做法是:用__________酶将苏云金芽孢杆菌的__________切成许多片段,然后将这些片段__________,再通过__________转入不同的受体细胞,让它们在各个受体细胞中大量_________,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把_________分离出来。 (3)进行基因操作一般要经过的四个步骤是__________、__________、__________、__________。 答案: (1)限制性内切酶 微生物 一种限制性内切酶只能识别一种特定的核苷酸系列,并在特定的点位切割 (2)限制性核酸内切 DNA 分别与载体结合 载体 复制 带有目的基因的DNA片段 (3)提取目的基因 目的基因与载体结合 将目的基因导入受体细胞目的 基因的检测和鉴定 2.下图是将人类的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图,所用的运载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的基因,质粒导入细菌B后,其上的基因能得到表达。请回答下列问题:( 注:质粒中的a点既是四环素抗性基因的存在位置,又是与目的基因的结合点;斜线部分为抗氨苄青霉素基因) (1)人工合成目的基因的途径一般有哪两条?________________________________________ ________________________________________。 (2)如何将目的基因和质粒结合成重组质粒?________________________________________ ________________________________________。 (3)目前把重组质粒导入细菌细胞的效率还不高,导入完成后得到的细菌,实际上有的根本没有导入质粒,有的导入的是普通质粒A,只有极少数导入的是重组质粒。 可通过以下步骤鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒;将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上,能够生长的就是导入了质粒A和重组质粒的细菌,反之则没导入。使用这种方法鉴别的原因是什么?________________________________________ ________________________________________。 (4)若把通过鉴定证明导入了普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养,发生的现象是什么?____________________________________。 (5)导入细菌B细胞的目的基因成功表达的标志是什么?___________________________________。 答案: (1)①将从细胞中提取分离出的目的基因作为模板,转录成 mRNA 单链DNA 双链DNA;②据蛋白质中氨基酸序列 mRNA中碱基序列推测DNA碱基序列 目的基因。 (2)①用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个有黏性末端的切口;②用同种限制酶切割目的基因,产生相同的黏性末端;③将切下的目的基因片段插入到质粒的切口处,再加入适量的DNA连接酶,使质粒与目的基因结合成重组质粒 (3)普通质粒A和重组质粒都含有抗氨苄青霉素基因 (4)有的能生长,有的不能生长。导入普通质粒A的细菌能生长,因为普通质粒A上有抗四环素基因;导入重组质粒的细菌不能生长,因为目的基因插在抗四环素基因的位置上,抗四环素基因的结构被破坏 (5)受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质,即人的生长激素 逆转录 按互补原则 推测 化学方法合成 祝 您 举例:基因治疗的过程(以镰刀型细胞贫血症的治疗为例) 步骤 过程 获取正常的血红蛋白基因 用限制性核酸内切酶从人的DNA分子中切取血红蛋白基因 形成重组运载体 用同一种限制性核酸内切酶在运载体DNA上切开一个切口,用DNA连接酶将正常血红蛋白基因连接在运载体DNA上,形成重组运载体 重组运载体的转化与筛选 将携带正常血红蛋白基因的重组运载体导入患者的造血干细胞中,并将重组运载体插入到染色体。用选择培养基筛选出含重组质粒的造血干细胞 步骤 过程 将含正常血红蛋白基因的造血干细胞回输给患者骨髓 将携带正常血红蛋白基因的造血干细胞输入患者骨髓中,此造血干细胞产生含正常血红蛋白的红细胞,以根治镰刀型细胞贫血症 结果:健康的基因表达掩盖了缺陷基因的表达。 说明 :对于遗传病的治疗,最根本的方法是进行基因替换或修复。基因治疗的最佳时期理论上是受精卵时期,这样可以使个体的每个细胞
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