不同甜瓜品种再生体系比较研究.docVIP

不同甜瓜品种再生体系的比较研究 　　摘要：以不同基冈型的甜瓜品种为材料，研究了不同激素组合，AgNO3质量浓度以及基因型对甜瓜再生的影响。结果表明，不定芽诱导中最适宜的激素组合为MS+1.0mg-Lˉ6-BA+0.5mg-LˉABA（脱落酸），在此培养基上薄皮甜瓜‘IVF501’和‘IVF509’的不定芽诱导率分别为88.00%、79.60%，厚皮甜瓜‘IVF525’和‘IVF604’的不定芽诱导率分别为76.50%、74.75%。不同质量浓度的AgNO3对甜瓜不定芽分化的影响有差异，1.0mg?Lˉ1AgNO3有抑制愈伤组织分化的作用，能有效减少玻璃化的发生，当质量浓度为2.0mg-Lˉ1时，虽然明显地抑制了愈伤组织分化，但同时降低了不定芽分化率。溥皮甜瓜‘IV F501’与厚皮甜瓜‘IVF525’具有较高的不定芽诱导率，将诱导的不定芽转入伸长培养基中（MS+6-BA0.05mg-Lˉ1），分化的不定芽能够伸长长大，在生根培养基中（MS+IAA0.4mg?Lˉ3容易生根。薄皮甜瓜获得完整再生植株需50―60d，厚皮甜瓜获得完整再生植株需60―75d。 　　关键词：甜瓜；离体再生；脱落酸（ABA）；硝酸银（AgNO3） 　　甜瓜（Cucumis melo L.）是世界重要的经济作物。植物组织培养技术是植物细胞工程和基因工程的关键技术之一。甜瓜高效再生体系的建立是遗传转化的基础。在甜瓜组织培养方面，日前已有通过真叶、子叶、下胚轴等多种外植体再牛完整植株的报道。 　　添加ABA（脱落酸）是多种难以再生植物组织培养的有效措施。前人以子叶作外植体，6-BA为主要诱导激素，辅之以ABA，通过器官直接发生途径，建立了不同基因型黄瓜子叶的再牛体系。李泠等报道，ABA在黄瓜再生中起到了重要的作川，与激动素相配合能促进植株分化，并能抑制异常胚状体形成，促进正常胚状体的发生。AgNO3（硝酸银）是乙烯活性抑制剂，BleeckerKende认为，AgNO3是以竞争性作用于乙烯作用部位而促进器官和体细胞胚胎发生，其作用主要表现为抑制愈伤组织形成，增加外植体产生不定芽的数量及提高植株再生频率。周音等研究表明，加入2.0mg-Lˉ1AgNO3还可有效防止生菜玻璃苗的产生。这在其他植物离体培养中也已得到证实。但是关于ABA以及AgNO3对甜瓜再生影响的研究鲜有报道，并且再生潜力也依基因型不同而明显不同。我国有丰富的甜瓜种质资源，本试验以不同基因型的甜瓜品种为材料，对影响再生的主要因素进行探讨，以期为瓜类作物快速繁殖、种质资源保存和创新等提供理论依据和技术支持。 　　1 材料与方法 　　1.1材料 　　供试材料为薄皮甜瓜‘IVF501’与‘IVF509’，厚皮甜瓜‘IVF525’与‘IVF604’，均由中国农业科学院蔬菜花卉研究所甜瓜课题组选育。 　　1.2方法 　　1.2.1 无菌苗的获得选取饱满种子，用无菌水浸泡5―6 h，然后将甜瓜种子去壳，经70%乙醇表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次，再用2%（w）NaCl0灭菌15min，无菌水冲洗3―5遍次，用无菌滤纸吸干，平放接种于不加生长调节剂的MS培养基上，置于温度为26℃、光强30～40μmol?mˉ2sˉ1、每天光照时间14h的培养室中培养，3～7d后，子叶开始变绿，胚根伸长，获得无菌苗。基本培养基为MS培养基，蔗糖30g-Lˉ1，琼脂7g?Lˉ1，pH5.8。 　　1.2.2 激素质量浓度筛选 甜瓜品种选用‘IVF501’，激素选用6-BA与ABA。待无菌苗子叶刚刚转绿时，从距离胚轴约2mm处剪下2片子叶，再横切为两部分，取近胚轴半片做外植体，叶背向培养基，叶面向上，分别接种于6-BA（1.0、1.5、2.0mg?Lˉ1）与ABA（O、0.5、1.0 mg?Lˉ1）不同质量浓度组合的培养基中，共9个处理，每皿接种9―11块外植体，每个处理20皿，30d后统计愈伤组织诱导率与不定芽诱导率. 　　愈伤组织诱导率/%=愈伤组织数量/外植体总数量×100： 　　不定芽诱导率/%=诱导出芽的外植体数量/外植体总数量×100。 　　1.2.3不同品种对不定芽诱导率与分化率的影响甜瓜品种选用‘IVF501’、‘IVF509’、‘IVF525’、‘IVF604’。根据1.2.2的试验结果，选出不定芽诱导与分化率较高的激素组合，将4个不同品种的子叶外植体接种于此培养基上，共4个处理，每皿接种9―11块外植体，每个处理20皿，30d后统计愈伤组织诱导率与不定芽诱导率。 　　1.2.4添加AgNO3对不定芽诱导与分化的影响甜瓜品种选用‘IVF501’、‘IVF509’、‘IVF525’、‘IVF604’。在MS+1.0mg.L-16-BA+0.5mg.L-1ABA培养中，添加0、1.0、2.