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不同发育时期椰子叶片精油的提取与成分分析 　　摘要：为明确引诱椰心叶甲取食的化学信息物质，利用同时蒸馏萃取法分别提取椰子的心叶、半展叶、老熟叶的精油，并采用气相色谱一质谱联用法对3者化学成分进行种类和含量的比较分析。结果表明，不同发育时期椰子叶片精油的主要成分为：2.3一二氢苯并呋喃、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚、2.6一二叔丁基-4-甲基苯酚、十四烷酸、棕榈酸、叶绿醇、浦酸和(z，z)-9，12-十八碳二烯酸等，这些化合物分别占椰子心叶、半展叶、老熟叶总精油含量的83.16％、67-23％、68.17％，但各成分在其含量上存在明显差异，这可能导致了它们对椰心叶甲的活性差异，本研究为初步确定椰子心叶对椰心叶甲的引诱活性成分提供了理论依据。 　　关键词：椰子叶片；精油；同时蒸馏萃取；气相色谱-质谱联用 　　中图分类号：S667.4　文献标识码：A　文章编号：1009-9980(2011)02-246-06 　　 　　椰子属棕榈科椰子属，为多年生热带木本油料作物，在我国主要分布于海南、台湾、广东、广西等地，栽培面积、产量及品质等均以海南为最，是海南省的特色水果。椰子是一种优质的农产品，既是果品又是油料，将椰子的整个可食部分与非可食部分开发利用。可获得很好的经济效益。 　　椰心叶甲是我国进境植物检疫的二类危险性害虫，原产于印度尼西亚与巴布亚新几内亚，现广泛分布于太平洋群岛及东南亚地区。在我国南部，特别在海南省，椰心叶甲成为棕榈科植物重要的害虫，特别对椰子树危害尤为突出。其主要危害寄主最幼嫩的心叶部分，幼虫、成虫均群栖潜藏于卷折的心叶内，啮食卷叶表皮薄壁组织，受害心叶呈现失水现象，新叶抽出伸展后为枯黄状，严重时顶部叶片均呈现火燎焦枯，引起心叶枯死，造成植株死亡。椰子树是海南独特的森林资源，椰心叶甲的危害，不但对生态景观造成破坏，还给海南的农业和旅游方面造成很大经济损失。目前对椰心叶甲的防治方法主要有杀虫剂防治和利用寄生蜂、绿僵菌等微生物防治。由于椰心叶甲主要为害椰子的心叶部分，对半展叶和老叶的危害次之，因此本文分析了椰子心叶、半展叶、老熟叶的挥发物质的成分，以期找到寄主心叶挥发物中对取食期椰心叶甲具有引诱活性的化学物质成分，以便更有效地防治椰心叶甲。 　　同时蒸馏萃取法(SDE)是Likens等在1966年改进发展起来的一种植物易挥发成分提取法，该法通过同时加热样品液相与有机溶剂至沸腾来实现，将水蒸汽蒸馏和馏出液的溶剂萃取两步合二为一，结果蒸馏和提取同时进行，只需要少量溶剂就可提取大量样品。挥发性成分得到浓缩。由于SDE法所获得的是精油在有机溶剂中的溶液，体积较大，便于操作，避免了通常蒸馏法提取精油时在器壁上吸附损失及转移微量精油时的操作困难。SDE法应用于挥发性成分提取分析在国内外已有较多报道，但迄今为止，尚未见应用于椰子叶片精油提取的报道。我们采用同时蒸馏萃取装置对不同发育时期椰子叶片精油进行提取，并用气相色谱一质谱联用仪对其成分进行分析比较，旨在找出心叶精油中特有成分，以期为探索诱导椰心叶甲取食的趋性物质提供科学依据。 　　 　　1、材料和方法 　　 　　1.1材料、试剂与仪器 　　椰子心叶、半展叶、老熟叶(于同一批椰树的不同发育时期进行取样)采集于海南儋州西庆农场。 　　二次去离子水；无水乙醚(使用前重蒸处理)、无水硫酸钠(120℃烘箱加热2h)均为分析纯试剂(广州化学试剂有限公司)。 　　同时蒸馏萃取装置(SDE)(广州芊荟化玻仪器厂)；气相色谱一质谱联用仪(GC-MS)(德国Finniga公司，Finnigan TRACE GC-MS)；RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。 　　1.2精油的提取 　　分别选取不同发育时期的椰子叶片用去离子水洗净、晾干表面水分，将其剪成约2cm×2cm的小段，称取200g置于2000mL圆底烧瓶中，加入800mL二次去离子水，连接到同时蒸馏萃取装置的一端，于电热套上加热保持微沸。另一端连接盛有60mL重蒸乙醚的250mL平底烧瓶，置45-48℃水浴中加热。同时蒸馏萃取3h后，去掉水层，收集乙醚层，向萃取液中加入5g无水硫酸钠除去水分，置-20℃冰箱冷藏备用。另取同样质量的相同叶片重复以上步骤，合并2次乙醚层收集液，置于-20℃冰箱中过夜，趁冷过滤除去无水硫酸钠，最后将滤液经旋转蒸发减压浓缩至2.0mL淡黄色液体，取0.3μL进行GC-MS分析。 　　1.3仪器分析条件 　　1.3.1色谱条件环境条件：室温20℃，相对湿度60％；毛细管柱：DB-130mx0.25mm；升温程序：45℃保持2min，以5℃?min-1升至80℃保持2min，以10℃?min-1升至180℃保持5min，再以10℃，min-1升至终温250℃ 　　进样口温度：25