乙型肝炎病毒基因型与表型相关性研究.docVIP

乙型肝炎病毒基因型与表型的相关性研究 　　【摘要】 目的：对乙型肝炎病毒（HBV）在人体内的分散情况进行调查，然后讨论它和感染临床表型是否有关系。方法：对PCR进行测序，测序之前先对其进行扩增，然后分析300例乙肝病毒感染者的HBV基因型，对HBV的基因型和临床表型之间的关系用t检验法和 字2检验法分析。结果：在300例的病毒感染者中，含有B基因型的患者180例，占60%，含有C基因型的患者120例，占40%。B基因型患者年龄（29.5±9.8）岁明显高于C基因型患者（35.2±11.4）岁，差异有统计学意义（P0.05）。C基因型在无症状病毒携带者的比例是31.2%，在慢性乙肝患者中比例为30.2%，明显低于肝癌患者的58.6%和肝硬化患者的60.0%，差异均有统计学意义（P0.05）；B基因型HBeAg阳性率55.6%明显低于C基因型的71.7%，差异有统计学意义（P0.05）；B基因型患者血清的HBV-DNA含量（5.62±0.92）log值明显低于C基因型患者的（5.98±0.76）log值，差异有统计学意义（P0.05）。结论：临床患者的身体状况和HBV的基因型有着密不可分的关系。从患者的年纪、HBeAg阳性比例和病毒水平来看，C基因型患者明显比B基因型多，因此C基因型患者的病情很可能进一步转为肝硬化，甚至是肝癌。 　　【关键词】 乙型肝炎病毒； 临床表型； 基因型 　　近些年来，专家们根据乙型肝炎病毒（HBV）S基因序列差异≥4.0%或者全基因组序列差异≥8.0，把HBV分成了8个基因型，这几年又有新的基因型I被发现。有数据说明，HBV基因型和病毒的复制、致病性、临床表现等都有很大的关系，它的特点就是按照特定的地域分布。这次研究采用的方法是先扩增PCR，然后对其进行测序，了解乙型肝炎病毒基因型怎样分布并探讨它在实际应用中的作用。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 搜集本院2011年1月-2012年12月的300例患者的HBV-DNA阳性血清。肝细胞癌30例，肝硬化44例，慢性乙肝感染者120例，没有症状的病毒携带者106例。受调查患者中，年龄19～69岁，平均36.5岁，男224例，女76例。诊断标准符合2000年修订的《病毒性肝炎治疗方案》。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 HBV基因型的鉴定 （1）核酸的提取：取血清50 μL，加入50 μL裂解液，100 ℃保温10 min，13 000 r/min离心5 min，上清即为HBV-DNA。（2）DNA的扩增：采用套式P进化树的构建并分析基因型。DNA的扩增：采用套式PCR法对病毒S基因进行扩增。外侧引物：5′-CCTCCTGCTGGTGGCTCCAGT-TC-3′（nt 22～77），5′-GGCGGCAAACCCCAAAAGACCC-3′（nt 1004～1025）；内 侧 引 物：5′-CTAG GACCCCT-GCTCGTGTTACA-3′（nt 181～203），5′-ATTACATATC-CCATGAAGTTAAG-3′（nt 870～892）。扩增条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s共35个循环，72 ℃ 5 min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，送上海生物工程有限公司进行测序。（3）基因型鉴定：应用Mega软件中NJ法进行系统进化树的构建并分析基因型。 　　1.2.2 HBV-DNA HBeAg的测定 根据说明书进行。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS 10.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 HBV基因型的分散情况 300份血清中180份为B型，占总数的60%；120份为C型，占总数的40%。 　　2.2 HBV基因型和年龄及性别的关系 在女性HBV感染者里面，B型的比例是65.5%，C型的比例是34.5%；在男性感染者里面，B型的比例是59.0%，C型的比例是41%。在这些男女受访患者中，HBV的基因型分散情况差异无统计学意义（P0.05）。C型患者的年龄（35.2±11.4）岁明显大于B型患者的（29.5±9.8）岁，差异有统计学意义（P0.05）。 　　2.3 HBV基因型在不同类型的感染者中的分布情况 在不同类型的感染者中，HBV基因型的分散情况的不同有统计学意义（P0.05）。C基因型在无症状病毒携带者的比例是31.2%，在慢性乙肝患者中比例为30.2%，明显低于肝癌患者58.6%和肝硬化患者的60.0%，差异均有统计学意义（P0.05）。可是在CHB和ASC两组病例中，B基因型和C基因型的构成比比较差异无统计学意义，