肠道标本地细菌学检查.pptVIP

粪便标本的细菌学检验 第八组 目的与要求 掌握粪便标本的方法 掌握粪便标本的细菌学检验程序与方法 Background 正常人的肠道中栖居大量的不同种类的微生物，组成人类健康极为重要的体内微生态环境——参与营养、消化、吸收及清洁肠道，维护健康的作用。 腹泻因病原菌或病毒在在肠道繁殖引发，引起 腹泻细菌种类多。 本实验主要介绍疑为沙门菌或志贺菌属感染者 或带菌者的粪便标本（或直肠拭子）中致病菌 的分离和鉴定。 由于肠道中存在大肠埃希菌等很多条件致病菌，其与肠道致病菌的主要区别之一是：大多数条件致病菌可分解乳糖，而绝大多数肠道致病菌则不分解乳糖。 分离肠道致病菌多用含乳糖的弱选择性鉴别培养液（如麦康凯琼脂等）以及对大肠埃希菌等条件致病菌有较强抑制作用、而又有利于肠道某些致病菌（如沙门菌及志贺菌属）生长繁殖的强选择性鉴别培养液。 Background Background 粪便标本常见的病原菌： ■G＋菌：葡萄球菌属、白色假丝酵母菌、艰难梭菌、结核分枝杆菌、蜡样芽孢杆菌 ■G－菌：志贺菌、沙门菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、亲水气单胞菌、类志贺邻单胞菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌 试剂与器材 菌株：伤寒沙门菌 培养基：麦康凯和SS琼脂平板 各种生化反应培养液及革兰氏染液等试剂（可参见微生物的自动分析及附录） 沙门菌多价“O”（A-F组）及单价“O”诊断血清、“H”因子诊断血清 标本的采集 由于粪便中细菌种类很多，故应根据检查目的的不同选择适宜的培养液或用适当方法处理，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出。 不能认为粪便中细菌含量多，粪便标本的采集就无须无菌操作。粪便标本的采集也应遵循无菌操作的原则。若便器或标本容器不洁而污染了变形杆菌，就可能影响病原菌的分离检出，甚至把污染菌误报，造成误诊。 标本的采集 采样的时期应合适。疑似痢疾患者应在发病初期、用药前采取标本。粪便标本采集时应挑取无尿液污染的有脓血、黏液部分的粪便2—3g（液状粪便可挑取絮状物），盛于无菌容器内送检。 在无法获得粪便时，可采用直肠拭子，即用灭菌棉拭子经0.9%氯化钠溶液或增菌培养液湿润后，插入肛门内)4—5cm处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌试管（Cary Blair系统运送管）或保存液中送检； 疑似伤寒患者应在发病2—3周内采集粪便标本。 标本的采集 在无法获得粪便时，可采用直肠拭子，即用灭菌棉拭子经0.9%氯化钠溶液或增菌培养液湿润后，插入肛门内)4—5cm处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌试管（Cary Blair，卡—布系统运送管）或保存液中送检；应采集可疑粪便，如立即患者粘液脓血便、霍乱患者的米泔水样便等。以为换乱患者，硬质碱性蛋白胨水中。 除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。 粪便标本如不能立即送检，可将标本放入甘油盐水保存液中，或保存于冰箱内（勿超过2小时）。 粪便标本的细菌学检验程序 粪便标本或肛拭子道标本 涂片 增菌培养 直接分离 报告 革兰染色；动力学观察与制动试验（KIA、MIU） 初步报告 需氧培养 GN增菌液或亚硒酸增菌液 碱性蛋白胨 TCBS平板或其它碱性平板分离 SS平板MAC平板EMB平板 副溶血性弧菌选择平板 菌落形态生化反应 菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏 菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏 步骤与方法 革兰氏染色 志贺菌与沙门菌：急性腹泻患者的粪便标本划线接种于SS平板和MAC平板。 慢性腹泻患者志贺菌或携带者应接种GN增菌液，沙门菌接种亚硒酸盐增菌液，再转种SS平板与MAC平板，观察小的、透明或半透明、无色或浅黄色的可以菌落生长，有时SS平板可见中心黑色菌落（H2S）。 挑选三个可疑菌落分别接种三支KIA、MIU培养基，观察结果。 挑取菌落进行革兰氏染色，观察细菌形态、排列。 采用伤寒沙门菌诊断血清进行血清学鉴定。 步骤与方法 生化反应鉴定第2日观察平板上有无可疑菌落，用接种针于上述平板中挑取单个可疑菌落（无色、半透明、光滑、较小）2—3个，分别接种至2—3管双糖培养液内，置37℃培养18—24h。第3日观察细菌生长情况，根据表10—2初步鉴定细菌种类，然后取双糖培养液上 的菌落进行系列生化鉴定。 表 不同肠道细菌在双糖培养液培养结果（教学实验模拟标本的结果） 序号 上层（乳糖） 下层（葡萄糖） 动力 可能结果 1 + + 有 大肠埃希菌 2 — + 有 伤