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乳酸菌微胶囊化的制备和存活率的研究 　　摘要：在人们越来越重视身体健康的今天，乳酸菌这种可以提高人体生理和保健功能的益生菌得到广大人民群众的重视。当然，实现乳酸菌生理作用的有效发挥，需要提高乳酸菌的生理作用，对于增强人们身体健康起到积极促进的作用。乳酸菌微胶囊化可以提升乳酸菌生理作用，但实现乳酸菌微胶囊化是有一定难度的。对此，本文将对乳酸菌微胶囊化的制备和存活率进行详细的分析和研究，希望对于充分发挥乳酸菌生理作用有很大帮助。 　　关键词：乳酸菌微胶囊化 微胶囊技术 存活率 　　中图分类号：R378 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）04-0062-01 　　乳酸菌是一类发酵乳糖产生乳酸的革兰氏阳性菌的总称，它可以抑制或杀死一些病原菌和食物腐败菌， 微胶囊技术是一项用途广泛而又发展迅速的新技术。在食品、化工、医药、生物技术等许多领域中己得到成功的应用。本文主要介绍了微胶囊的技术、实验方法、存活率及微胶囊技术在食品工业中的作用和应用。 　　1 微胶囊技术 　　微胶囊技术是利用天然的或合成的高分子材料，微胶囊技术问世以来，因其赋予微胶囊化产品的独特性能而被广泛应用于各行各业，受到了众多 研究者的重视和青睐，成为一项重点研究开发的高 新技术。作为一种食品加工的新技术，微胶囊技术 在欧美等国家的应用已十分普遍，微胶囊化产品在 现代国际食品工业也占有重要地位，使乳酸菌更好地起到有益于健康的作用。 　　类别可做壁材物质特点：天然高分子材料明胶、阿拉伯胶、虫胶、紫胶、淀粉、糊精、蜡、卡拉胶、白蛋白、琼胶等无毒、性能稳定、与生物相容性强、成膜性强、生物降解效果佳。 　　半合成高分子材料甲基纤维素、乙基纤维素、丁酸乙酸纤维素、领苯二甲酸纤维素等毒性小、粘度大、易水解、耐高温性差。 　　合成高分子材料 PLA、PLLA、PE、聚丙烯、聚氨基酸、聚乙二醇、聚合酸酐、聚甲基丙烯酸乙酯等毒性小、成膜性强、稳定性高 　　2 乳酸菌微胶囊化的制备和存活率的研究 　　2.1 试剂和仪器 　　海藻酸钠、氯化钙、变性淀粉、胃蛋白酶、MRS琼脂培养基、磷酸二氢钾、喷雾机（BUCHI-B290，瑞士布琦公司）、胰蛋白酶、光学显微镜等。 　　2.2 实验方法 　　（1）菌株培养。根据筛选培养基染色后的水解圈与菌落直径比，选择比值较大的菌株进行复筛摇瓶实验，按上述方法制备粗酶液，测定酶活，获得正向突变株13株，其中酶活最大的为UV-2，对其进行连续6代传代，检验其遗传稳定性。由试验结果（表2）可知，经6代遗传稳定性试验证明UV-2正向突变株稳定性较好，与出发菌株最高酶活10.7 U/mL相比，酶活提高了2.075倍。 　　（2）微胶囊制备。①冷冻干燥法。制备好的无菌海藻酸钠真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。装置仪器，安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内，抽气一般若在30分钟内能达到93.3Pa（0.7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持压力6-8小时即可。②微胶囊的包埋率测定。由于乳酸菌微胶囊化是为了保证其较高的存活率，因此微胶囊化过程中必须具备以下条件：①制备 过程要温和、 快速，对菌体损伤小，尽可能在生理 条件下制备；②使用的试剂和壳材料必须是食品 级的，对菌体和人体无毒害作用；③微囊要有足够 的机械强度以抵抗培养过程中的搅拌，不破裂，有高的生产能力，并能生成均匀、 最佳尺寸的微囊颗。④微胶囊的耐酸性测定。葡萄糖2.0g，牛肉膏1.0g，蛋白质1.0g，无水乙酸钠0.5g磷酸氢二钾0.2g，硫酸钾0.02g，酵母提取物0.5g，柠檬酸氢二胺0.2g，硫酸锰0.0025g，硫酸镁0.02g，吐温80 0.1g蒸馏水100ml，ph为6.8。在此环节中需要注意进行平板菌落数耐酸后的存活率实验，为后续分析人体胃液中微胶囊的释放情况提供帮助。对于平板菌落数耐酸后的存活率实验的实施主要是取一定数量的平板菌落数，将其放置在于人体酸性相似的不同酸性溶液中，对其进行厌氧培养，在一定时间后观察平板菌落数，进而计算其存活率。⑤模拟人体胃液的配制。参照中国药典2005版第二部配制.（National Formulary Committees （国家药典委员会）.Chinese Pharmacopoeia. 2005）模拟人体胃液：取稀盐酸16.4 mL（取盐酸 234 ml，加水稀释至 1000 ml），加水约800 mL与胃蛋白酶10 g，摇匀后，加水稀释至100 mL即得。⑥微胶囊的肠液性测定。取两份0.5g微胶囊，一份置于50ml解囊液中，另一份置于50ml灭菌水中