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专题一 微生物培养技术;细菌菌落;;一、微生物的分离和纯培养;（一）无菌技术;2、消毒;A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min，日常生活常用 B、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min，适用于不耐高温的液体，如牛奶。 C、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒; 氯气消毒水源 D、射线消毒法，如紫外线;（1）定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 。;（2）灭菌的方法：;C、湿热灭菌 方法：高压蒸汽灭菌P8 适用于培养基的灭菌;1、培养基定义：（课本第9页）;固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等 半固体培养基可观察微生物的运动 液体培养基常用于发酵工业。;固体培养基;半固体培养基;液体培养基;选择培养基;鉴别培养基;;称量：准确地称取各种成分。牛肉膏比较黏稠， 可以用玻棒挑取，放在称量纸上称量。牛 肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称量时动作要 迅速，称后要及时盖上瓶盖。;（2）.溶化： ①加水加热熔化牛肉膏 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的 水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒 取出称量纸。 ②加入蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解； ③加入琼脂； ④用蒸馏水定容到100mL。 整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。;搁置斜面------斜面培养基(P11);待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。;倒平板技术;（三）接种技术;斜面培养基上接种方法;平板培养基上接种方法;平板划线操作;⑵平板划线要点;2、稀释涂布平板法;系列稀释操作;70%的酒精;1、微生物实验室培养的基本操作程序; （1）制备牛肉膏蛋白胨培养基;（2)配制培养基：计算称量；熔化； 调PH；分装； 灭菌； 倒平板 （3）接种：平板划线法；稀释涂布平板法。 （4）培养： 倒置，37℃恒温箱，12和24h。 （5）纯化培养：倒置，37℃恒温箱，24h。 （6）菌种保藏：临时、长期保存法。;菌种的保存;二、测定微生物的数量;（一）测定微生物数量的方法;2、间接计数法：;1、土壤取样、制备土壤悬液;;3、样品稀释; 在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂， 指示剂变红，就可以准确的鉴定该种细菌能够分解尿素。; 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。; 菌落数的选择： 一般选择菌落数在30～300的平板上进行计数。 当只有一个稀释倍数的平均菌落数符合此范围时，则 以该平均菌落乘以稀释的倍数； 若有两个稀释倍的平均菌落数均在30～300之 间，则按两者菌落总数之比值来决定：若比值小于2 应采取两者的平均数，若大于2，则取其中较小的菌 落总数。 ;三、培养基对微生物的选择作用;（一）、基础知识;（二）、筛选;常用的刚果红染色法有两种;（1）土壤取样 （2）选择培养（可省略） （3）梯度稀释 （4）涂布培养 （5）挑选产生透明圈的菌落 （6）微生物培养（纯培养）