基于PCR的染色体步查技术幻灯片.pptVIP

* * 基于PCR的染色体步查技术 染色体步查(Chromosome walking) 是指由生物基因组或基因组文库中的已知序列出发,逐步探知其旁邻的未知序列或与已知序列呈线性关系的目的序列的核苷酸组成的方法和过程。 经典的染色体步查方法比较烦琐，适合于长距离步行，而基于PCR的染色体步行技术相对而言则比较简便，适合于短距离步行。 基于PCR的染色体步查技术 典型的PCR反应需要2个分别位于目的序列两端的引物，而在染色体步行时目的序列只有一端是已知的，因此利用PCR技术进行染色体步行的关键在于提供PCR需要的另一个引物。 利用载体或接头的PCR技术 利用引物错配的染色体步查技术 利用随机引物的染色体步查技术(TAIL-PCR) 利用载体或接头的PCR技术 这类方法的第一步通常都是酶切基因组DNA，连接载体或接头,以提供PCR需要的另一端引物. 利用载体的PCR 利用接头的PCR 寡聚盒介导的PCR 环状PCR I-PCR(Inverse PCR) P-PCR(Panhandle PCR) 利用载体的PCR 1989年，Shyamala等利用单特异引物PCR(single specific primer PCR, SSP—PCR)以小鼠伤寒杆菌组氨酸转运操纵子为起点进行连续步查