有氧运动改善心肌梗死心脏交感神经重构的抗炎机制.docVIP

有氧运动改善心肌梗死心脏交感神经重构的抗炎机制 　　摘要：目的：探讨有氧运动是否通过抑制NF-κB通路激活改善心肌梗死后交感神经重构。方法：45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、心肌梗死组、心肌梗死+有氧运动组。结扎冠状动脉左前降支制备大鼠心肌梗死的模型，术后1周心肌梗死+有氧运动组成活大鼠进行4周跑台运动。采用免疫组织化学方法观察心肌梗死灶周及左室游离壁TH阳性神经纤维分布及表达；采用western blot检测心肌中NF-κB p65及IκBα蛋白表达；采用实时定量RT-PCR检测IL-1β及TNF-α mRNA表达。结果：与假手术组大鼠相比，心肌梗死组心肌中TH阳性神经纤维密度明显增加，形态粗大且空间分布紊乱，尤以梗死灶周为著；有氧运动干预后TH阳性神经纤维密度显著降低，形态更趋于正常。心肌梗死可激活NF-κB通路，表现为心肌核蛋白中NF-κB p65含量增加，胞质蛋白中IκBα含量降低，其下游转录产物IL-1β及TNF-α mRNA明显上调；而有氧运动干预可明显抑制NF-κB通路激活，减少NF-κB p65及增加IκBα蛋白表达，并下调IL-1β及TNF-α mRNA表达。结论：有氧运动通过抑制心肌梗死后NF-κB及其转录系统的激活，减少心肌组织炎症反应的过度放大，抑制交感神经过度再生，从而改善心肌梗死后交感神经重构。 　　关键词：有氧运动；心肌梗死；神经重构；nuclear factor-κB；炎症 　　中图分类号：G804.21文献标识码：A文章编号：1006-2076（2015）04-0068-06 　　心肌梗死（myocardial infarction， MI）是威胁人类健康的主要疾病之一，恶性室性心律失常及心源性猝死是MI患者恢复期致死、致残的重要原因。一系列研究证实MI后恶性室性心律失常高发与异常心脏交感神经重构导致的心脏自主神经失衡有关，同时MI后交感神经重构也可直接或间接地影响电重构及心肌重构，引起心电不稳定或心功能恶化[1-2]。目前认为心脏交感神经重构是MI后心脏病理生理发展的重要环节，探索MI后交感神经重构的具体机制将为降低恶性心律失常以及猝死发生率、改善远期预后提供新的治疗方向。 　　近年来的研究显示，心脏局部或全身炎症反应均可上调心肌中神经生长因子（nerve growth factor，NGF）表达，从而促进心脏交感神经再生。炎症反应作为神经再生的基础环节，在MI后交感神经重构的过程中发挥着关键作用，因此，抗炎有望成为改善MI后交感神经重构、降低心律失常发生率的有效手段。 　　有氧运动作为心血管疾病重要的康复手段逐渐成为运动医学领域研究的热点，MI早期适宜强度的有氧运动可通过逆转心肌重构[3]、增加每搏输出量及射血分数[4]、改善左室收缩功能[5]等发挥心脏保护作用。新近研究证实有氧运动具有显著的抗炎作用[6]，Chen等[7]研究发现，有氧运动可显著改善MI大鼠左心室交感神经分布，降低交感神经再生，但其机制尚不明确。因此，本研究拟在MI大鼠模型基础上，以核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）及其下游炎症因子为研究主线，深入探讨有氧运动对炎症调控因子NF-κB及心脏交感神经再生的影响，从有氧运动抑制炎症反应角度探讨运动对MI后心脏交感神经重构的干预作用，从分子水平阐明运动防治MI后心源性猝死的可能机制。 　　1材料与方法 　　1.1实验材料 　　健康成年雄性SD大鼠45只，体重250～280 g（购自山东大学实验动物中心）。Trizol试剂盒购于美国Invitrogen公司；Real-time RT-PCR试剂盒购于大连宝生物工程公司，引物由上海生工生物工程公司设计并合成；细胞核蛋白及细胞浆蛋白抽提试剂盒购于碧云天生物技术研究所；抗酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase， TH）抗体购于美国Millipore公司，辣根过氧化物酶标记兔抗绵羊二抗购于美国PKL公司，抗NF-κB p65抗体购于美国BD公司，抗IκBα抗体及抗Histone 3抗体购于美国Cell Signaling公司，抗GAPDH抗体购于北京康为世纪生物科技有限公司。其余试剂均为国产分析纯。 　　1.2实验方法 　　1.2.1心肌梗死模型制备 　　SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、心肌梗死组（MI组）以及心肌梗死+有氧运动组（MI+AE组），每组15只。利用结扎冠状动脉左前降支的方法制备大鼠心肌梗死的模型[8]，所有动物用10% 水合氯醛溶液0.3 mL /100 g腹腔注射麻醉，气管插管，小动物呼吸机通气。于大鼠胸骨左侧3-4肋间开胸，结扎左前降支，以心电图aVL导联ST段抬高0.2mV作为手术成功标志，随后逐层关胸。Sham组大鼠作为对照，只