基因工程第二节1jun.pptVIP

2.提高限制性内切核酸酶对 低浓低纯度DNA制剂反应效率的方法 ① 纯化DNA； ② 增加核酸内切酶的用量，平均每微克底 物DNA可高达10单位甚至更多些； ③ 扩大酶催化反应的体积，以使潜在的抑 制因素被响应地稀释； ④ 延长酶催化反应的保温时间。 ? DNA的甲基化 1. 原核生物的限制-修饰系统的组成成分是： 甲基化酶：对自身DNA起修饰作用，从而使限 制性内切核酸酶不能识别，保护自 身DNA免受降解。 限制性内切核酸酶：破坏入侵的外源DNA，防御异源遗传信息进入体内。 因此，甲基化作用直接影响限制性内切核酸酶的活性 ? 大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。部分限制性内切酶对甲基化的DNA不能切割，如FbaI和MboI等。而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法： ① 选用上述酶的同功酶，如Sau3AI，DNA识别切割位点与MboI相同；但不受甲基化影响； ? DNA的甲基化 ? 解除限制修饰作用的方法： ② 利用甲基化酶缺失的受体细胞进行DNA的制备，如E. coli JM110和链霉菌等，前