含人端粒酶逆转录酶启动子和融合型自杀基因FcyFur重组真核表达.DOCVIP

含人端粒酶逆转录酶启动子和融合型自杀基因Fcy::Fur重组真核表达 质粒的构建及其特异性杀伤卵巢癌细胞的实验研究 朱元方1伍霞1 李攀2胡丽娜3乐爱文4汤雄文1 1 重庆医科大学附二院妇产科；2重庆医科大学超声影像学研究所； 3 四川大学华西附二院妇产科；4重庆医科大学附一院妇产科 摘 要 目的 构建含人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子和融合型自杀基因Fcy::Fur的重组真核表达质粒并探讨它对卵巢癌细胞的特异性杀伤作用。方法 ①从pORF5- Fcy::Fur质粒中PCR扩增Fcy::Fur片断，亚克隆进p2XEB质粒骨架中，构建含hTERT启动子和Fcy::Fur基因的重组真核表达质粒p2XEB-Fcy::Fur；同理，将Fcy::Fur亚克隆进pGL3-Promoter质粒，构建含猿猴病毒40（SV40）启动子和Fcy::Fur基因的重组质粒pGL3-Pro-Fcy::Fur，重组子经酶切鉴定、测序；②RT-PCR检测卵巢癌细胞SKOV3和人胚肺成纤维细胞MRC-5中hTERT mRNA的表达，荧光素酶分析hTERT启动子在两种细胞中活性；③用超声微泡作载体，将上述两种质粒分别转染SKOV3和MRC-5,与前药5-氟胞嘧啶（5-FC）共培养后，CCK-8法测定转染细胞增殖抑制率；AO/EB（吖啶橙/溴化乙啶）染色观察细胞凋亡；RT-PCR检测Fcy::Fur mRNA的表