BK通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布-现代生物医学进展.PDFVIP

现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.14 NO.8 MAR.2014 14 11 · · doi: 10.13241/ki.pmb.2014.08.003 BK 通道在细胞膜上的单分子定位及空间分布* 1 1 2 1 1 1 刘永锋 侯盼盼 程龙 王 伟 孔文娟 丁久平 1 430074 2 230027 华中科技大学生命科学与技术学院 湖北武汉 ；中国科学技术大学生命科学学院 安徽合肥 ） BK HEK293 摘要 目的：研究大电导、钙离子和电压激活的钾离子通道（ 通道）在 细胞膜上的单分子定位及其总体空间分布情况。 mEos2 Dronpa BK 2 将这些质粒在HEK293 方法：分别用 、 等荧光蛋白标记 通道的琢 亚基和辅助性 亚基， 细胞内瞬时转染以表 BK 达通道蛋白，然后用激光共聚焦荧光显微成像、全内反射荧光显微成像、光敏定位荧光成像等技术观察 通道的亚细胞定位及 并用电生理实验技术检测荧光蛋白对BK 。 单分子分布， 通道有影响 结果：激光共聚焦荧光显微成像和全内反射荧光显微成像技 ，BK ，它的 2 术只能在亚细胞水平定位通道蛋白 通道在细胞膜上聚集并形成不规则的蛋白簇 琢 亚基和 亚基在细胞膜上完全共 BK ，虽然 2 ，它们之间依然存在空间 定位；光敏定位荧光成像技术成功定位 通道蛋白簇里面的单分子 琢 和 亚基紧紧靠在一起 BK BK 2 。 ， 距离； 通道的质膜表达和功能特性不受荧光蛋白的影响 结论： 通道蛋白簇里面包含大量的琢 和 亚基的蛋白单分子 它们紧密地聚集在一起，但是并没有完全共定位，在分子水平上揭示了BK 通道琢 和 亚基功能耦合的结构基础，为以后研究大 分子蛋白质间的相互作用机制提供了很好的分子模型，光敏定位荧光成像技术作为一种全新的单分子荧光成像手段，在基因表 达、信号通路、蛋白质相互作用等许多重要生命活动的研究中发挥重要作用。 BK PALM