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动物钙蛋白酶系统研究进展 　　摘要：钙蛋白酶系统在动物体内的各组织细胞中普遍表达，主要由钙蛋白酶（Calpains，CAPN）、钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastain，CAST） 和骨骼肌特异性钙蛋白酶（Muscle specific calpain，P94）组成。对动物体屠宰后的肌肉僵嫩程度有着重要作用。对CAPN和CAST的结构、功能、研究进展做了阐述和分析。 　　关键词：钙蛋白酶抑制蛋白（CAST）；钙蛋白酶（CAPN）；结构；功能 　　中图分类号：S858.3 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）02-0081-04 　　钙蛋白酶系统在生物体内的各组织中广泛表达，主要由钙蛋白酶（Calpains，CAPN）、钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastain，CATS）和骨骼肌特异性钙蛋白酶（Muscle specific calpain，P94）组成，其参与动物肌肉生长、细胞信号转导、神经发育等生理活动。另有研究表明钙蛋白酶Ⅰ及钙蛋白酶抑制蛋白在动物屠宰后的肌肉嫩化中发挥重要作用。目前，CAPN1及CAST已被认为是影响动物肌肉嫩化过程的重要候选基因。近年来，随着人们生活水平的日益提高，对肉类质量的要求越来越高，其中肉质细嫩就是一个重要的标准。随着分子生物学的不断发展，对于钙蛋白酶系统的研究已经进入了分子领域，可以从微观领域更清晰的了解其的结构，功能以及研究进展。 　　1 钙蛋白酶（CAPN） 　　1.1 CAPN同工酶种类 　　目前在动物体内已经发现了15种钙蛋白酶同工酶，根据其在机体内的存在位置可以分为无组织特异性蛋白酶和组织特异性蛋白酶两种。Calpain1、2、4、5、7、10、12、13a、14和15为无组织特异性蛋白酶；Calpain3、6、8a、9、11（也称CAPN10）为组织特异性蛋白酶，分别在骨骼肌、胎盘、胃和黏膜、消化道、睾丸中对应表达，其中Calpain1和Calpain2研究得最为深入。 　　Goll 等[1]发现在这15种钙蛋白酶中Calpain1、2、3、8、9、11 和12拥有钙蛋白酶典型的4个结构域（从氨基端到羧基端依次为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ），Calpain5、6、7、10和15的结构中则缺少第Ⅳ结构域。因此又可以根据是否拥有典型的结构域将其划分为典型和非典型钙蛋白酶。 　　1.2 CAPN的结构 　　钙蛋白酶（Calpain）是一类在生物细胞中普遍表达，依赖于钙激活的中性半胱氨酸巯基内肽酶，主要存在于细胞质中，根据激活其活性所需要的钙离子浓度可以分为μ- Calpain（激活的Ca2+浓度以微摩尔计量，CAPN1）和m-Calpain（激活的Ca2+以毫摩尔计量，CAPN2），主要分布在肌原纤维Z盘附近。CAPN1和CAPN2都是不均一的二聚体蛋白，由一个分子质量为80 ku的大亚基和一个分子质量为30 ku的小亚基组成，小亚基是单基因的产物而大亚基则是不同基因的产物，发生自溶时80 ku的大亚基降解为76 ku，30 ku的小亚基降解为17 ku。 　　通过克隆CAPN1的cDNA序列分析发现其大亚基由4个结构域组成，约含700个氨基酸残基，具有催化活性；小亚基由两个结构域组成，具有调节功能。典型的钙蛋白酶大亚基4个结构域中，位于N端的结构域Ⅰ，由19个氨基酸残基组成，约占氨基酸残基数的10%，在钙蛋白酶激活状态下或激活前易发生自溶现象，具有活性调节作用；结构域Ⅱ，约占氨基酸残基数的35%，是表现水解活性的关键区域，其催化活性中心主要由105位的半胱氨酸，262位的组氨酸以及286位的天冬酰胺残基组成，104 位天冬氨酸和 287 位脯氨酸在已知的 CAPN 中相同，属高度保守区域，由于钙蛋白酶是由钙调蛋白和木瓜蛋白酶以非共价键嵌合而成，因此其与木瓜蛋白酶、组织蛋白酶有一定的水解相似性；结构域Ⅲ，含有磷酸化位点和磷脂结合域，主要发挥钙蛋白酶的活性调节作用，约占氨基酸残基数的35%。位于C端的结构域Ⅳ，是钙结合区域，含有钙结合蛋白特有的4个EF-手结构，与其他钙结合蛋白如CaM（钙调素蛋白）有明显的相似性。钙蛋白酶小亚基也含有两个结构域，与大亚基类似，其也有4个EF-手结构，故也具有结合钙的活性。 　　CAPN2与CAPN1一样，由一分子80 ku的大亚基和一分子30 ku的小亚基组成。两者大亚基的氨基酸序列存有差异而小亚基相同，大亚基同样有四个结构域，但是只有结构域Ⅱ是两种同工酶氨基酸重复序列高的区域，结构域Ⅱ是CAPN2的半胱氨酸蛋白酶活性区域，由半胱氨酸、组氨酸、天门冬酞胺构成活性中心。结构域I可能与钙蛋白酶自我水解有关，参与钙蛋白酶的活性调节，结构域Ⅲ由于与其他蛋白质氨基酸序列相似性甚低，功能至今尚未明确。 　　根据GenBank上发布的序列