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包装材料中钙离子在模拟生物膜上作用机理研究 　　【摘 要】在裸玻碳电极的基底上，制备磷脂双层膜，以Fe（CN）63-/4-为探针分子， 使用循环伏安法和交流阻抗技术研究了钙离子与s-BLM 的相互作用，结果表明， 钙离子与磷脂双层膜（s-BLM）之间可以发生比较强烈的相互作用， 诱发s-BLM 上形成离子通道， 并且作用后的膜在10mmol/L 的EDTA溶液中可以复原，表明撤走钙离子则通道关闭。 　　【关键词】钙离子 循环伏安 交流阻抗 离子通道 模拟磷脂双层膜 　　生命体系中的许多吸收与代谢过程都在生物膜上进行，它在生命过程中的作用十分重要。由于膜的构成、功能独特复杂，实时与原位观测和研究是十分困难的。因此，人们广泛关注仿生膜的研究。从平板双层类脂膜被发现以来，此膜已被广泛而深入地应用作为模拟膜的模型[1]。但是平板双层类脂膜有寿命较短、稳定性差的缺点，在其他领域的应用有一些局限性[2]。近年来，稳定性好、长寿命的双层类脂膜制备方法的出现，广泛地应用于电化学生物传感器[3]和离子通道等行为的研究[4]。 　　钙离子是机体的必需元素，参与细胞的多种生理活动，具有极其重要的生理功能， 钙离子与模拟膜作用，出现离子通道，引起人们很多的兴趣，如Ca2+能激活一些细胞质膜上的钾离子（K+）通道[5] ，在支撑的卵磷脂双层膜上，钙离子能与磷脂极性头部作用，改变膜结构与磷脂的构象[6]。 　　本文在玻碳电极表面上制备磷脂双层膜，采用循环伏安（CV）和交流阻抗方法（EIS）研究钙离子与磷脂双层膜之间的作用，钙离子在膜上能诱导通道，并且作用后的膜，可以自我复原，即撤走钙离子则通道关闭。 　　1 实验部分 　　1.1 试剂及仪器 　　卵磷脂（PC），氯化钙，乙二胺四乙酸；去离子水；所有试剂都为分析纯。电化学工作站（CHI832，美国），电化学工作站（VMP2美国），超声清洗仪；二次纯水蒸馏器（1810B）。 　　1.2 磷脂双层膜的制备 　　实验中我们略做更改，主要模拟膜的制备方法已经有了描述[7]，配制卵磷脂氯仿溶液20μg/μL作为制备膜的贮备液，-4℃保存。玻碳电极用抛光粉Al2O3抛光，利用超声清洗，5分钟后，在0.1mol/L KOH溶液浸入预处理后的玻碳电极，1.5V的电压下，极化3分钟，取出电极，用N2吹干，将吹干的电极，再浸入成膜液中30秒，取出立即浸入0.1mol/L KCl，卵磷脂极性作用形成双层膜。 　　1.3 实验部分 　　在1.0mmol/L的K3Fe（CN）6中进行循环伏安和交流阻抗实验。振幅为10mv，式电势（+0.225），频率范围200KHz-0.1Hz。分别以裸玻碳电极，PC修饰电极，与氯化钙作用后的PC修饰电极为工作电极。 　　2 结果与讨论 　　2.1 电极的循环伏安响应 　　支撑磷脂双层膜的质量，我们通过循环伏安方法来判断。循环伏安实验1.0mmol/L的Fe（CN）63-/4-溶液中进行，扫描速度：50mV/s，裸玻碳电极的电化学响应见图（1-a）。膜修饰电极的电化学响应见图（1-b）。比较图（1-a）与图（1-b）的，Fe（CN）63-/4-的峰电流几乎消失在图（1-b）中可以看出，证明Fe（CN）63-/4-探针离子无法到达电极表面，发生电子转移反应，支撑磷脂膜制备是很成功的在玻碳电极表面。 　　2.2 膜修饰电极的交流阻抗响应 　　修饰电极表面性质的研究最有效的方法之一是交流阻抗，测定电极电容来判断磷脂双层膜的形成。图2是电极的阻抗图谱（Nyquist曲线）。裸玻碳电极的阻抗谱见图（2-a），几乎表现为一条直线，电子传递的物质在电极上几乎没有阻挡，在裸GC电极上Fe（CN）63-/4-的电子传递反应是受扩散控制的，反应较快，Fe（CN）63-/4-探针非常容易到达电极表面。 　　膜修饰电极见图（2-b），呈现一个半径较大的半圆。表明膜内部致密，无空隙，电极表面电荷传递电阻显著增大，Fe（CN）63-/4-探针不能通修饰膜，这一个过程几乎完全受动力学控制[8]。实验证实双层膜成功制备。 　　我们选择Randles等效电路[9]（如图2中插图）对测量结果进行拟合，进一步研究修饰磷脂膜的阻抗信息， 阻抗测量的结果，图中Rs为电解质电阻、Cm为磷脂膜电容、Rm为磷脂膜电阻、Cdl双层电容、Rct电荷传输电阻。拟合计算可得Cm值，磷脂的相对介电常数κ=2.05[9]， 真空介电常数ε0=8.85×10-14 F/cm， 由（1）式计算可得磷脂膜厚度d。 　　Cm=ε0κ/d （1） 　　计算得出膜厚度d为4.53nm，与文献中的厚度约为4nm-10nm吻合[10]，再次证明双层膜的构筑成功。 　　2.3 钙离子与双层膜的相互作用 　　4mmol/L的氯化钙