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原子力显微镜在纳米医学研究中应用 　　[摘 要] 原子力显微镜（AFM）是扫描探针显微镜（SPM）家族主要成员之一。自问世以来，因其样品制备简单、可在多种环境中运作、高分辨率等技术优势，由最初的纳米水平单分子成像，逐渐扩展到表面功能的研究、分子间力的测量、可控性原子和分子操作等功能，在纳米医学研究中发挥着无可替代的重要作用。 　　[关键词] 扫描隧道显微镜， 扫描探针显微镜 原子力显微镜 纳米医学 　　 　　中图分类号：R319文献标识码：A 　　 　　纳米医学（nanomedicine）是把纳米科技应用到医学研究和临床的一门新兴学科。纳米医学的发展，依赖于纳米结构的形貌和性能表征，以及纳米材料和纳米加工能力的获得。在众多的技术手段中，最具竞争力的首推扫描探针显微镜（scanning proble microscope，SPM）家族[1-3]。目前，SPM家族中已经产生了二三十种显微镜，原子力显微镜（Atomic Force Microscopy，AFM）是主要成员之一。这些显微仪器适用于不同的领域，具有不同的功能。虽然它们功能各异，但都有一个共同的特点：使用探针在样品表面进行扫描。 　　一、AFM的工作原理[4-7] 　　AFM是由IBM公司的Dr.Binning与史丹佛大学的Quate于1985年发明的。AFM 类似于扫描隧道显微镜（scanning tunneling microscope，STM），它的许多组件与STM是共同的。AFM系统主要由以下几部分组成：带针尖的微悬臂（力敏感元件）、微悬臂运动检测装置、监控微悬臂运动的反馈回路、使样品进行扫描的压电陶瓷扫描器件、计算机控制的图像采集、显示及处理系统。其中关键的是前两部分。 　　AFM通过检测待测样品表面和一个微型力敏感元件之间的极微弱的原子间相互作用力，来研究物质的表面结构及性质。其工作原理是：将一对微弱力极端敏感的微悬臂一端固定，另一端的微小针尖接近样品，这时由于针尖尖端原子与样品表面原子间存在极微弱的排斥力，作用力将使得微悬臂发生形变或运动状态发生变化。扫描样品时，利用传感器检测这些变化，就可获得作用力分布信息，从而以纳米级分辨率获得表面结构信息。与STM主要不同点是，AFM用一个对微弱力极其敏感的悬臂针尖代替了STM的针尖，并以探测悬臂的偏折代替了STM中的隧道电流。AFM具有很宽的工作范围。可以在诸如真空、大气、低温以及各种液体环境中使用，从而可使研究者选择适当的环境进行研究。 　　AFM的工作模式主要有轻敲式（Tapping Mode,TM）和接触式（Contact Mude）两种。轻敲模式成像技术在用AFM观察柔软、粘连、易碎的样品方面，TM成像术的出现是一个关键性进步。TM-AFM在空气中扫描时，探针通常以50000～500000次/秒的频率交替接触和离开表面。由于针尖接触表面造成能量损失，悬臂振荡减弱,这种振幅的减小可以用来鉴别、测量表面状态。当针尖通过表面隆起部分时，悬臂在较小空间内振荡，振荡的振幅同时变小；相反，当针尖通过凹陷处时，悬臂在较大范围振荡,振幅变大。数字反馈回路用来调整针尖-样品间距以维持恒定的振幅和作用于样品上的力。轻敲式AFM工作方式比较适合生物医学样品。 　　接触式AFM包括恒力模式和恒高模式。前者利用反射光位移引起的光电二极管输出电压的变化构成反馈回路控制压电陶瓷管伸缩，从而调节固定于扫描器上样品的位置，保持样品和探针间作用力（悬臂弯曲度）不变，测量每一点高度的变化。后者保持样品和探针间的距离不变，测量每一点作用力的大小。这种模式在调节探针与样品距离前即可直接观测悬臂弯曲度的改变。轻敲式AFM在扫描过程中，探针与样品表面轻轻接触，悬臂受存在于两者间的排斥力作用随样品表面起伏发生高频振颤。由于探针与样品的接触短暂，因此它更适用于质地脆或固定不牢的样品。 　　二、AFM的技术优势 　　AFM本身的技术优势，是其在生物学中得以迅速发展的主要原因。首先，AFM具有非常高的横向分辨率和纵向分辨率。第二，AFM技术的样品制备简单，无需对样品进行特殊处理，因此，其破坏性较其它生物学常用技术（如电子显微镜）要小得多；第三，AFM能在多种环境（包括空气、液体和真空）中运作，生物分子可在生理条件下直接成像，也可对活细胞进行实时动态观察；第四，AFM能提供生物分子和生物表面的分子/亚分子分辨率的三维图像；第五，AFM具有对标本的分子或原子进行加工的能力，例如，可搬移原子，切割染色体，在细胞膜上打孔等能对单个生物分子进行操纵；第六，AFM能以纳米尺度的分辨率观察局部的电荷密度和物理特性，测量分子间（如受体和配体）的相互作用力；第七，由AFM获得的信息还能与其它的分析技术和显微镜技术互补。值得一提的是，AFM能够在生理状态