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Western blot 实验技术;Western Blot基本原理; 一、实验原理
Western Blot法又称免疫印迹法（IBT），分三个阶段进行。
第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）。
第二阶段：电转移。
第三阶段：固相酶免疫测定。;;三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体;
（一）原理;; （二）材料
1、洗涤液：含0.05％吐温-20的pH7.4的PBS
2、酶标抗人IgG
3、阴性对照血清、阳性对照血清
4、底物溶液
5、终止液
6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、 滴管、吸管等。 ;; （三 ）方法
1．次日取出已封闭的NC膜，用洗涤液漂洗5次，每次1min。
2. 将剪下条带放入反应槽中，加入1ml洗涤液，再已加入20μl血清混匀，37℃恒温摇动40min。
3．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。
4．加入1ml酶标羊抗人IgG，37℃恒温摇动30min。
5．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。
6．加入底物液1ml，???色10min。
7．加入终止液终止反应。
;;结果判断
用肉眼观察。出现染色条带为阳性，不出现染色条带为阴性，不同的疾病可以出现不同的条带。跟据条带位置 判断结果。
判断标准：
1．抗Sm抗体：同时出现29KD、28KD、13.5KD条带。
2．抗SSA抗体：60KD、52KD任意出现一条带。
3．抗SSB抗体：47KD、45KD应用时出现条带。
4．抗Jo-1抗体：55KD出现条带。
5．抗Scl-70抗体：同时出现86KD、67KD条带。
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