千佛菌对荷H22小鼠Mφ吞噬功能和IL1影响实验研究.docVIP

千佛菌对荷H22小鼠Mφ吞噬功能和IL1影响实验研究 　　【中图分类号】R285.5【文献标识码】A【文章编号】1672－3783(2012)03－0263－01 　　 【摘 要】探讨千佛菌对H22(肝癌)小鼠免疫功能的影响。方法：观察各组Mφ、IL- 1含量,分别采用吞噬中性红比色法、MTT 比色法进行测定。结果: 荷瘤小鼠模型组与正常组比较, Mφ吞噬功能、IL- 1含量均显著降低( P0.01),用药组与荷瘤小鼠相比,腹腔Mφ吞噬功能、IL- 1含量均增高,其中大剂量用药组显著升高( P0.01)。结论:千佛菌能增强荷瘤小鼠 Mφ的吞噬功能及IL- 1的产生，提高机体免疫功能。 　　 【关键词】千佛菌; Mφ吞噬功能; IL- 1活性; H22 　　 千佛菌是一种药食两用的真菌类植物,具有很好的保健作用和很高的药用价值。贺新怀教授等研究发现??［1-2］?,千佛菌能提高肾阳虚小鼠和荷S180 肉瘤小鼠的免疫功能, 改善小鼠肾阳虚症状,抑制 S180肉瘤生长。本文以荷H22小鼠为研究对象, 探讨千佛菌对Mφ吞噬功能和IL- 1产生的影响。 　　 1材料和方法 　　 1.1实验材料 　　 千佛菌购自陕西省镇安县千佛菌种植基地。 　　 1.1.1药液制备: 取千佛菌干品500g经蒸馏水洗涤后,加10倍量的蒸馏水,煎煮2次,每次30min,合并滤液,分成 2 份,分别浓缩至每毫升溶液相当于原药材 1g( 1: 1)、2g( 2: 1),置于4℃备用。 　　 1.1.2实验动物: 健康昆明种小鼠,雌雄各半,18-20g,4-6 周龄。购自第四军医大学实验动物中心。 　　 1.1.3瘤株:H22瘤株由第四军医大学实验动物中心提供。 　　 1.1.4主要试剂: RPMI- 1640培养液购于Gibco 公司。LP S、ConA 购 　　于 Sigma 公司。MTT为Flrka公司产品。10% 活性小牛血清、PBS 购于华美生物公司。DMSO 国产分析纯,购于成都化学试剂厂。 　　 1.1.5主要仪器: 超净工作台,倒置显微镜,CO2恒温培养箱,酶标仪,电子天平, 离心机,24及96孔细胞培养板。 　　 1.2实验方法 　　 1.2.1动物分组、模型制备及用药: 将昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、千佛菌小剂量组、千佛菌大剂量组四组。除正常对照组外,其余三组皮下接种 H22瘤细胞悬液,制成小鼠荷瘤模型。然后千佛菌小剂量组、千佛菌大剂量组分别用 1: 1( 相当于原药材 1g/ ml)、2: 1( 相当于原药材2g/ ml) 浓度的千佛菌溶液灌胃 1m l, 正常对照组、模型对照组给予相同剂量的生理盐水。各组均灌胃1次/d, 连续 14d。于第15天处死动物检测指标。 　　 1.2.2腹腔Mφ吞噬功能的测定:取各实验组小鼠,按文献??［3］?制备腹腔Mφ,浓度为 2×107/ml,加入 96孔细胞培养板 100μl/孔,每样品二孔,37℃ ,5% CO2条件下培养2h,吸去未贴壁细胞,加入无菌 0.075% 中性红溶液( pH7.2,用 PBS 配制),100μl/孔,混合培养15min,去上清, PBS洗三遍,加入 DMSO 100μl/孔,4℃过夜,待溶解后,酶标仪530nm处测定OD值。 　　 1.2.3IL- 1活性测定:取健康昆明种小鼠,按文献??［3,4］?制备胸腺细胞,以含 2.5 μg/mlConA,10%小牛血清的 RBM R-1640 培养液调整细胞浓度为1×107/ ml,加入96孔板,100 μl/孔,做5个平行孔,37℃、5%CO2条件下培养72h, 1500r/ min 离心10min,去上清,以不完全培养液洗涤3次,以完全 1640培养液重新调整细胞浓度为5×106/ ml,加入96孔板, 100μl/孔, 做5 个平行孔。按文献??［3,4］?制备贴壁Mφ,加入含小牛血清10% , LPS10μg/ ml 的 RPMI - 1640 培养液10μl/孔,继续培养24h,吸获上清,做1:8,1:16两个稀释度,加入含有正常胸腺细胞的培养板,100μl/孔,每个稀释度做3个平行孔, 并设阴性对照和丝裂原对照。将培养板置于37℃、5%CO2培养箱继续孵育24h, 加入MTT液10μl/孔,加入DMSO,100μl/孔,振荡混匀3min,待溶解后,酶标仪 530nm处测OD值。 　　 1.2.4统计学处理 　　 实验数据用均数标准差（x±s）表示, 采用方差齐性检验, t 检验。 　　 2实验结果 　　 2.1 千佛菌对荷瘤小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影响: 见表 1。 　　 表1 千佛菌对荷瘤小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影响（x±s） 　　 　　组别 n Mφ吞噬中性