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四种化学还原法制备胶体金比较研究 　　摘要：以柠檬酸三钠、鞣酸、抗坏血酸、硼氢化钠为还原剂，采用４种不同化学还原法制备出单分散性好的胶体金样品；比较研究了４种方法制备的胶体金的光学性质、贮存稳定性及其对蛋白质的标记能力。结果表明，不同方法制备得到的胶体金样品其外观色泽均呈现红色略带紫色或葡萄酒红色，可见光谱图最大吸收峰波长为５１０～５２５ ｎｍ，胶体金粒径在５～２０ ｎｍ之间。不同贮存条件对胶体金稳定性有影响，其中以４℃条件下贮存的胶体金最稳定；不同方法制备得到的胶体金对蛋白质的最佳标记量有影响。 　　关键词：胶体金；化学还原法；光学性质；贮存稳定性；蛋白质标记能力 　　中图分类号：Ｏ６５；Ｏ６４８．１６；ＴＧ１４６．３＋１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）03－0476-03 　　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｆｏｕｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｐｒｅｐａｒｉｎｇ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｇｏｌｄ 　　 　　ＹＡＮＧ Ｙｕ－ｘｉｎ１，ＹＥ Ｙａｎｇ１，ＺＨＯＵ Ｙｏｕ－xｉａｎｇ２，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｈｏｎｇ１ 　　（１． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ； ２． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ， ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｆｏｕｒ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ with ｃｉｔｒａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ， ｔａｎｎｉｃ ａｃｉｄ， ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｓｏｄｉｕｍ ｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ ａｓ ｒｅｄｕｃｔａｎｔｓ． The oｐｔｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ， ｓｔｏｒａｇｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ the ｆｏｕｒ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｏｆ all the ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｗａｓ ｒｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｌｉｔｔｌｅ ｐｕｒｐｌｅ ｏｒ ｒｅｄ ｗｉｎｅ ｃｏｌｏｒ． Ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ５１０～５２５ ｎｍ． Ｐａｒｔｉｃｌｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｗａｓ ５～２０ ｎｍ． Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｏｒａｇｅ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ． Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｒｅｍａｉｎｅｄ ｏｐｔｉｍａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｔ ４℃． Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｅｐａｒｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ； ｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ； ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ； ｓｔａｂｉｌｉｔｙ； protein labeling ability 　　 　　胶体金（Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｇｏｌｄ）也称金溶胶（Ｇｏｌｄｓｏｌ），是由氯金酸被还原成原金后形成的金颗粒悬液，颜色呈橘红色到紫红色。１９７１年首次用免疫金标记技术研究沙门菌壁细胞抗原成分，将胶体金与抗体结合，应用于电镜水平的免疫细胞化学研究［１］。１９７４年，Ｒｏｍａｎｏ等用胶体金标记抗球蛋白抗体，建立间接免疫金染色法。此后，胶体金作为一种新型免疫标记技术得到很快发展［２］。免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，具有简单、快速、准确和无污染等优点，在医学、动植物检疫、食品安全监督等领域得到了日益广泛的应用［３］。 　　胶体金的制备一般采用化学还原法，主要有白磷还原法、抗坏血酸还原法、柠檬酸三钠还原法、鞣酸－柠檬酸三钠还原法、乙醇超声波还原法和硼氢化钠还原法［４］。常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。由于白磷易燃易爆，一般实验室不宜采用［５］。采用化学还原法制备胶体金时，