地黄耐百草枯有效成分分析.docVIP

地黄耐百草枯有效成分分析 　　摘要：地黄对百草枯除草剂具有较强的耐性，为了解地黄耐百草枯的有效成分，分别以300 g/hm2或600 g/hm2的百草枯处理地黄。结果表明，处理后10 d，药害等级分别为0级和2级，且药害症状恢复较快；当百草枯与地黄提取液或毛蕊花糖苷标准样品混合处理大豆幼苗时，百草枯对大豆叶片的药害症状减轻，说明地黄提取物或毛蕊花糖苷具有解除百草枯氧化毒性的功能。地黄叶片和块根中黄酮含量分别为2.29%和1.59%，毛蕊花糖苷的含量分别是7015、0.475 mg/g，叶片中的含量多于块根。 　　关键词：百草枯；地黄；黄酮；毛蕊花糖苷；耐药性 　　中图分类号：S451.2文献标志码：A文章编号：1002-1302（2014）01-0100-02 　　收稿日期：2013-05-20 　　基金项目：国家自然科学基金（编号。 　　作者简介：杨德亮（1987―），男，吉林长春，硕士研究生，从事农田杂草防除研究。E-mail：dely1987@。 　　通信作者：吴明根（1958―），男，吉林龙井人，博士，教授，从事农田杂草防除研究。Tel：（0433E-mail：5minggen@163.com。百草枯（Paraquat）属于高氧化活性的灭生性除草剂，在土壤中易失去活性，无残留[1]。地黄（Rehmannia glutinosa L.）[2]为玄参科地黄属植物，是传统的中药植物资源。前期研究结果表明，地黄生长期具有耐除草剂百草枯特性[3-4]，地黄乙醇提取物具有清除DPPH自由基能力的抗氧化特性[5]，地黄等玄参科植物提取物――梓醇、毛蕊花糖苷、多糖等具有清除DPPH自由基的能力[6-7]。因此，本试验进行地黄提取物以及毛蕊花糖苷对减轻百草枯除草剂的药害特征分析，揭示地黄耐百草枯除草剂的机理。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　1.1.1供试植物地黄（Rehmannia glutinosa L.）品种为河北省引种品种（代号85-5）。大豆品种为黑农48。 　　1.1.2供试除草剂与试剂 百草枯：20% 克无踪由先正达南通作物保护有限公司提供。芸香苷标准品：由广州威佳科技有限公司提供，毛蕊花糖苷标准品由上海源叶生物科技有限公司提供；甲酸和甲醇为色谱纯；亚硝酸钠、95%乙醇、硝酸铝、99.5%乙醚、氢氧化钠均为分析纯。 　　1.1.3供试仪器液相色谱仪（Agilent 1100型），电子分析天平（CPA324S型），轨道震荡培养箱（SI500型），分光光度计（UV-1700 PharmaSpec型），减压旋转蒸发仪（EYEL4型）和索氏提取器等。 　　1.2试验方法 　　1.2.1地黄耐百草枯特性观察地黄出苗后20 d进行百草枯田间茎叶处理，剂量分别为300、600 g/hm2，以喷清水处理为对照。各处理重复3次，小区面积0.01 hm2。施药后10、20、40 d分别调查药害症状。 　　1.2.2地黄提取物和毛蕊花糖苷标准品的百草枯解毒性测定将20%百草枯1 mL与不同量的地黄块根提取液混合，加水定容至 100 mL，利用微型喷雾器均匀喷洒到长出2个复叶的大豆叶片上，施药后20 d分别调查药害症状观察。 　　将不同浓度的百草枯分别与不同浓度的毛蕊花糖苷标样混合配比后均匀涂抹在大豆叶片上，处理后20 d肉眼观察症状。 　　1.2.3地黄体内总黄酮含量的测定总黄酮类标准曲线制作：称取芸香苷5.0 mg，用60%乙醇定容至50 mL，得浓度为 0.1 mg/mL 的标准溶液。准确吸取标准溶液0、1.0、2.0、30、4.0、5.0 mL，分别加入30%乙醇至5 mL。再加0.3 mL 5% NaNO2 溶液，摇匀放置6 min；再加0.3 mL 10% Al（NO3）3 溶液，摇匀放置6 min；再加1 mol/L NaOH溶液4 mL，再加 0.4 mL 水，摇匀，放置10～15 min；于510 nm波长处测定吸光度，绘制芸香苷浓度（C）与吸光度（D）的标准曲线。 　　地黄提取、待测液的配制：将新鲜地黄叶片（7月9日取样）和块根（10月18日取样）在60 ℃烘干箱中烘干72 h。叶片采用索氏提取法，以无水99.5%乙醚为脱脂剂，于43 ℃水浴中脱脂除去脂类和脂溶性色素，再将其置于烘干箱中 130 ℃ 烘干备用。称取干燥地黄块根和叶片粉末样品各1份0.5 g，于50 mL锥形瓶中，分别加70%乙醇，以50 ℃水浴浸提4 h，过滤，得测定样液。准确吸取样液2.5 mL，稀释到 50 mL，再吸取5 mL于试管中，加0.3 mL 5% NaNO2 溶液，摇匀，放置 6 min，再加0.3 mL 10% Al（NO3）3 溶液，摇匀，放置 6 min，