基底硬度对肝细胞胞间粘附复合物稳定性影响王红兵1张持1杨力1.DOCVIP

基底硬度对肝细胞胞间粘附复合物稳定性影响 王红兵1，张持1，杨力1, 邹小兵2，于光磊3，刘美霞2，许蓉1，林雨1 （1 重庆大学生物工程学院，2 重庆大学化学工程学院，3 重庆大学数理工程学院，重庆 400044） 摘要：目的 通过比较汇合生长肝细胞（L02）对不同硬度基底（3.6 kPa、10 kPa和30 kPa）的响应，探查细胞间粘附复合物稳定性差异的成因。 方法 运用实时显微拍摄观察L02细胞在不同硬度基底上的形态特征；采用免疫荧光染色技术检测细胞肌动蛋白骨架构象和β-连环蛋白表达分布；应用Western Blotting方法检测β-连环蛋白的表达及其磷酸化水平(phosphor Tyr654)。 结果 （1）不同硬度基底上汇合生长L02细胞胞间粘附复合物稳定性不同，在EDTA作用下随基底硬度增加，细胞分离时间缩短；（2）汇合生长L02细胞在软基质上肌动蛋白骨架成皮质下环，β-连环蛋白分布于细胞连接处。随着基底硬度增大细胞骨架环变得不完整，胞内骨架呈放射状分布，β-连环蛋白弥散分布于细胞质中；（3）随基底硬度增加L02细胞膜上β-连环蛋白表达显著降低（P0.01），细胞质中磷酸化的β-连环蛋白(phosphor Tyr654)的表达量显著增加（P0.01）。 结论 （1）基底硬度影响肝细胞粘附复合物稳定性，基底硬度越大，复合物稳定性越差。（2）基底硬度增加可以导致β-连环蛋白磷酸化水平（phosphor Tyr654）增高，是致使复合物稳定性下降的重要因素。 关键词：肝细胞; 基底硬度; 粘附复合物; β-连环蛋白 中图分类号：Q291 文献标识码：A 基金项目：国家自然科学基金面上项目；国家111计划资助项目(B0623) 通讯作者：王红兵 副教授，TelE-mail: HYPERLINK mailto:whbdzx@whbdzx@。 Effects of substrate stiffness on the stability of adhesion complexes of hepatic cells WANG Hongbing1, ZHANG Chi1, YANG Li1, ZOU Xiaobing2, YU Guanglei3, LIU Meixia2, XU Rong1, LIN Yu1 (1 Bioengineering College of Chongqing University,2 Chemistry and Chemical Engineering College of Chongqing University,3 Learn mathematical engineering College of Chongqing University , Chongqing 400044, China) Abstract: Objective The behavior of confluent hepatic (L02) cells cultured on substrate with different stiffness were studied to investigate the diversity of adhesion complexes stability. Methods: The real-time photomicrography was applied to record the morphology of L02 cells; Immunofluorescence staining was used to test the distribution of F-actin and β-catenin; Western blotting was applied to detect the expression of β-catenin and its phosphorylation(phosphor Tyr654). Results (1) Adhesion complexes of confluent LO2 cells exhibit distinct stability when these cells were grown on substrate with different stiffness. When treated with EDTA, L02 cells on rigid substrate separated more quickly than those on soft substrate. (2) The F-actin of confluent L02 cells formed a ring-like co