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第八章微生物的遗传和变异 主要内容: 介绍遗传变异的物质基础；遗传物质在 细胞中的存在方式。重点基因突变的规律和 机；诱变育种的程序；营养缺陷菌株的筛 选；基因重组（转导、转化、接合、原生质 体融合等）；菌种的复壮与保藏。 8.1 证明核酸是遗传物质基础的经典实验 （1）细菌转化实验 肺炎球菌无毒的RⅡ型和有毒的SⅢ型 （2）噬菌体的感染实验 大肠杆菌T2噬菌体：35S标记蛋白质，32P标记核酸 （3）病毒的拆开和重建实验 烟草花叶病毒（TMV） 8.2 基因突变与突变育种 8.2.1基因突变的原因 转换 碱基置换 颠换 基因突变 缺失 移码突变 突变 添加 染色体畸变：添加、缺失、重复、易位、倒 位以及染色体数目变化 A 诱变机制 诱变是指在物理或化学诱变剂的作用下，促使生物细胞发生突变的过程。 它的作用机制主要是： （1）引起碱基对的置换 包括转换和颠换。不同的诱变剂可通过直接或间接方式引起碱基置换，或是先形成局部交联，然后通过错误配对引起碱基置换的作用。 *直接引起碱基的置换 它们是一类可直接与核酸碱基发生化学反应的诱变剂，包括亚硝酸、羟胺和各种烷化剂(硫酸二乙酯, 甲基磺酸乙酯, N-甲基- N′-硝基- N-亚硝基胍, N-甲基- N-亚硝基脲,乙烯亚胺,环氧乙酸,氮芥等)。 它们可直接与一个或几个核苷酸发生化学反应，从而引起DNA复制时碱基配对的转换，并进一步使微生物发生变异。 *间接引起碱基的置换 这类诱变剂的作用是通过活细胞的代谢活动渗入到DNA分子中，然后引起复制时的配对错误，从而引起突变。 这类诱变剂是一些碱基类似物，如5-溴尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、8-氮鸟嘌呤、2-氨基嘌呤和6-氯嘌呤等。 它们渗入后有时构象发生改变，造成错误配对。 *形成局部交联引起的碱基置换 这些诱变剂主要是紫外线及其它电离辐射。 它们作用于核酸可引起局部结构的改变或交联，如紫外线可使嘧啶形成水合物或使相临的嘧啶形成二聚体，二聚体的出现会减弱双链间氢键的作用，并引起双链结构发生扭曲变形，从而引起复制时碱基的配对错误，导致微生物体的突变或死亡。 （2）移码突变 这是指由一种诱变剂引起DNA分子中的一个或少数几个核苷酸的增添(插入)或缺失，从而使该部位后面的全部遗传密码发生转录和翻译错误的一类突变。 啶类染料(原黄素、 啶黄、 啶橙、α-氨基 啶等)和一系列称为ICR类的化合物(它们是一些由烷化剂与 啶类化合物相结合的化合物)，都是移码突变剂。 它们的作用机理可能是由于 啶类化合物是一种平面型三环分子，结构与一个嘌呤-嘧啶对十分相似，故能嵌入两个相临的DNA碱基对之间，造成双螺旋的部分解开(两个碱基对原来相距0.34纳米, 当嵌入一个 啶分子时, 就变成0.68纳米)，从而在DNA复制过程中，会使链上增添或缺失一个碱基，结果引起了移码突变。 （3）染色体畸变 某些理化因子，如X射线等的辐射和烷化剂、亚硝酸等除了能引起点突变外，还会引起DNA的大损伤—染色体畸变。 它既包括染色体结构上的添加、缺失、重复、倒位和易位，又包括染色体数目的变化。 B 自发突变的机制 自发突变是指微生物在没有人工参与下所发生的突变。 （1）背景辐射和环境因素的诱变 （2）微生物自身代谢产物的诱变 （3）互变异构效应 T和G会以酮式或烯醇式两种状态出现，C和A会以氨基或亚氨基两种状态出现。 （4）环出效应 8.2.2基因突变的类型 按突变体表型特征的不同，突变分为： A 形态突变型 营养缺陷型 B 生化突变型 抗性突变型 抗原突变型 C 致死突变型 D 条件致死突变型 E 其它突变型 如毒力、糖发酵能力、代谢产物的种类和产量以及对某种药物的依赖性突变型等。 8.2.3基因突变的特点 A 不对应性： 即突变的性状与引起突变的原因间无直接的对应关系。 B 自发性： C 稀有性 ： 突变频率(指每一细胞在每一世代中发生某一性状突变的几率)一般在10-6～10-9。 D 独立性：某一基因的突变，既不提高也不降低其它基因的突变率。 E 诱变性：通过诱变剂可提高自发突变的频率。 F 稳定性： G 可逆性：正相突变 回复突变 8.2.4 突变育种 （一）利用自发突变育种 （1）从生产中选育 如从噬菌体污染的细菌发酵液中有可能分离到抗噬菌体的再生菌。 （2）定向培育优良菌种 一般指利用某一特定环境长期处理某一微生物培养物，同时对它们不断进行移种传代，以达到积累和选择合适的自发突变体的一种古老的育种方法。 巴斯德用42oC培