基于PCR―DGGE间作油茶林土壤细菌多样性.docVIP

基于PCR―DGGE间作油茶林土壤细菌多样性 　　摘要：土壤微生物多样性是评价土壤质量的重要指标，为探究林农间作对油茶林土壤微生物多样性的影响，采用PCR-DGGE方法研究了油茶林间作大豆、间作花生2种间作模式不同时期对油茶林土壤细菌多样性的影响。结果表明：间作处理各时期的土壤微生物种群相似性、微生物多样性指数均高于对照处理；间作处理微生物多样性指数保持在3.2～3.4之间；间作处理各时期土壤微生物均匀度指数为0.960～0.982；各处理的微生物种群相似性、微生物多样性指数与季节变化相关。 　　关键词：油茶林；林农间作；土壤微生物；多样性 　　中图分类号： S154.38+1文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2016）08-0057-03 　　林农间作是指将多年生木本植物通过空间或时间布局与农作物合理安排在同一土地经营单位内，使其中各组分在生态和经济上具有相互作用[1]。研究表明，间作能显著提高土壤微生物的生物量[2]，改变土壤微生物群落结构，提高土壤微生物的群落结构多样性[3-4]，对土壤有机质的分解、腐殖质的形成、养分的转化与循环等过程[5]也有促进作用。间作豆科植物还能通过生物固氮提高土壤氮素水平、增加产量[6-7]。目前，关于林农间作的研究大多关于间作系统中的物理因素，如间作对林下小环境中光、热、水[8-9]、土壤养分[10]的影响，而关于间作体系中土壤微生物多?有缘难芯拷仙伲?对油茶林土壤微生物多样性的研究未见报道。 　　油茶是世界四大木本油料植物之一，是我国特有的木本油料植物，广泛分布于我国南方地区[11]。近年来，随着市场需求的发展及国家对油茶产业的支持，油茶逐渐成为我国南方地区的一种重要经济作物。 　　通过对间作大豆、花生油茶林根区（距植物根系0～20 cm）土壤微生物多样性进行对比研究，探讨间作大豆、花生对油茶根区土壤微生物多样性的影响，以期为提高油茶林间套作生产的经济效益提供依据。 　　1材料与方法 　　1.1试验设计 　　试验于江西省宜春市袁州区西村镇（27°44′9.83″N，114°11′24.32″E）油茶基地进行，该地属于中亚热带季风气候区，具有四季分明、热量丰富、降水充沛、日照充足、霜期短、气候资源丰富等特点，有利于农作物和林木生长。试验地的年均日照时数约为1 737.1 h，年均气温为16.2～17.7 ℃，年均降水量约为1 624.9 mm，日均温度≥10 ℃的活动积温为 5 050～5 644 ℃。试验地土壤为红壤，地力均匀，便于排灌。 　　试验处理包括间作花生、间作大豆、无处理对照。试验用油茶林为4年生油茶幼林，株行距为2 m×3 m，长势良好。 　　处理1：于造林后1年开始每年间种大豆，本研究中于2014年4月底间种，于同年7月收获，收获后将大豆苗覆于样地。处理2：于造林后1年开始每年间种花生，本研究中于2014年5月间种，于同年8月收获，收获后将花生苗覆于样地。CK处理：选取1块纯林样地作为无处理对照。 　　1.2林间取样 　　本研究分别采集间作花生油茶林、间作大豆油茶林、对照纯林间作植物收获时及收获后的土壤样品，间作大豆、间作花生处理第1次采样时间分别为7、8月，收获后第2次采样时间分别为8、10月。每个处理在样地内以对角线法选取5株油茶，采集油茶根区（距油茶根系0～20 cm）表层0～20 cm土壤样品，采集后混合。 　　将林间取得的土样放入冰盒保存，带回实验室后迅速过2 mm土筛，除去杂物。将过筛土样于-20 ℃下保存，用于土壤微生物群落结构的研究。 　　1.3.3土壤微生物多样性的DGGE图谱分析 　　使用Bio-Rad DCode Universal Mutation Detection System电泳系统进行DGGE分析。采用浓度为8%的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度梯度为45%～65%（100%变性浓度为100 mL聚丙烯酰胺凝胶中加入40 mL去离子甲酰胺与42 g尿素），每孔加样为25 μL PCR产物、5 μL 6×loading buffer，于60 ℃恒温条件下[JP3]在1×TAE缓冲液中100 V电泳10 h。电泳完成后银染照相。 　　1.4数据分析 　　采用Quantity one软件识别PCR-DGGE图谱中的泳道及条带，得出量化图及相应数据，进行数学未成对加权聚类分析（UPGMA），计算物种均匀度、Shannon-Wiener多样性指数。Shannon-Wiener指数（H）、均匀度（E）的计算公式为： 　　[HS+7mm][JZ]H=-∑[DD（]s[]i=1[DD）]PilnPi；E=H/lnS。 　　式中：Pi为第i条条带的优势度，S为样本的总条带数[12]。 　　2结果与分析