基于化学成分和生物效应栝楼桂枝汤质量评价研究.docVIP

基于化学成分和生物效应栝楼桂枝汤质量评价研究 　　[摘要] 该研究采用超高效液相色谱-串联质谱的方法，分析测定栝楼桂枝汤中的24种化学成分，在此基础上，结合吗替麦考酚酯诱导的斑马鱼神经元损伤药效模型对栝楼桂枝汤进行神经保护生物活性评价，旨在探讨建立一种综合化学成分与生物效应的栝楼桂枝汤质量评价模式，研究结果表明建立的方法可行，基本稳定可靠，可为中药复方的质量控制研究提供参考。 　　[关键词] 栝楼桂枝汤； 超高效液相色谱-质谱； 斑马鱼神经损伤模型 　　[Abstract] The paper was aimed to establish a quality evaluation model for Gualou Guizhi decoction based on the chemical compositions and biological effects. Ultra high performance liquid chromatograph-mass spectrometer was used to analyze and determine 24 kinds of chemical compositions in Gualou Guizhi decoction， and then， biological activity effect was quantitatively assessed in a zebrafish neuronal injury model which was induced by mycophenolate mofetil （MMF）. As a result， the established method for quality evaluation of Gualou Guizhi decoction based on the chemical compositions and biological effects is feasible， stable and reliable， which can provide reference for quality control of compound Chinese medicines. 　　[Key words] Gualou Guizhi decoction； UPLC-MS； Zebrafish neuronal injury model 　　在保证安全性的前提下，中药复方的质量控制，其关键在于评价其有效性与可控性。然而目前的质控方法，主要通过检测一种或某几种有效成分来进行评价，存在一定的缺陷，如缺乏质量控制的科学性与系统性，存在非法添加对照品的风险等。随着近年来生物活性测定法，具有整体可控，药效密切相关等优势的凸显，已逐渐成为中药质量控制和评价的重要发展方向[1-4]。 　　栝楼桂枝汤，处方来源于张仲景的《金匮要略》，具有解肌祛邪，舒缓筋脉之功效。在课题组前期的研究中发现，该方通过多途径发挥对MCAO模型大鼠的脑保护作用[5-9]。目前，斑马鱼模型已被广泛应用于中枢神经保护的药物活性筛选[10-12]。本实验在采用超高效液相色谱-串联质谱分析测定化学成分的基础上，结合斑马鱼神经元损伤模型，进行栝楼桂枝汤对中枢脑保护的生物活性检测，初步探索建立基于化学测定和生物活性的中药复方质量评价模式，为丰富中药复方质量控制研究提供参考。 　　1 材料 　　1.1 仪器 　　ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱仪，Xevo TQD三重四级杆质谱仪（美国Waters公司）；KQ-500DE数控超声仪（昆山市超声仪器有限公司）；解剖显微镜（SZX7，OLYMPUS，Japan）；与显微镜相连的相机（TK-C1481EC）；精密电子天平（CP214，OHAUS，America）；AZ100型荧光显微镜（尼康公司）；NIS-Elements D 3.10 高级图像处理软件（Media Cybernetics 公司）。 　　1.2 试剂 　　没食子酸甲酯、芍药内酯苷、2-羟基肉桂酸、酸枣仁皂苷A，购自于成都曼斯特生物科技有限公司，纯度均≥98%；没食子酸、原儿茶酸、儿茶素、对羟基苯甲酸、香草酸、芍?苷、甘草苷、甘草素、肉桂酸、甘草酸、6-姜酚、甘草次酸、獐牙菜苦苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、4-羟基苯甲酸甲酯，购自于中国食品药品检定研究院，纯度均≥99%；氧化芍药苷、4-羟基肉桂酸、紫云英苷、3-羟基肉桂酸、异甘草苷、甘草查尔酮A、8-姜酚、6-姜烯酚购于上海同田生物科技有限公司，纯度均≥98%。 　　色谱纯乙腈（美国Merck公司）；水为超纯水。吗替麦考酚酯（购自上海晶纯实业有限公司，批号H14J6335），吖啶