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基于小麦酯酶有机磷农药残留快速检测研究 　　摘要：研究了小麦酯酶检测有机磷农药的残留分析方法，根据酶抑制法的原理，对反应温度、pH、反应时间、显色剂及样品提取液等条件进行优化，得出采用固兰B盐既兼顾了底物和显色剂双重作用，又具有底物稳定性好、灵敏、简便实用的特点，同时也体现出固兰B盐法的优越性，其最低检出浓度为0.1mg/kg。 　　Abstract： This article studies the analysis method of using wheat esterase to detect organophosphorus pesticide residues. According to the principle of enzymatic inhibition method， the reaction temperature， pH， reaction time， and the agent sample extracts are optimized. It is concluded that using fast blue salt B can not only considers the dual function of the substrate and the chromogenic agent， but also has the features of stable， sensitive and practical substrate， and at the same time the advantages of fast blue salt B are shown. Its minimum detectable concentration is 0.1mg/kg. 　　关键词：小麦酯酶；检出；有机磷农药 　　Key words： wheat esterase；detection；organophosphorus pesticide 　　中图分类号：TS210.7 文献标识码：A 文章编号：1006-4311（2015）33-0208-02 　　0 引言 　　目前的农药残留快速检测方法有多种形式，大多数是基于酶抑制法而建立。但是检测酶源大多来自价格不菲的动物乙酰胆碱酯酶，需要花费大量的时间和成本去检测，虽然能得到有关植物酯酶的大量信息，但日常操作都使用从不同植物中提取的源粗酶，在研究资料不充分的条件下难以展开进一步的开发和利用；目前农药残留检测方法不多，并且大多数检测方法检出限、灵敏度较差，可检测的农药都已列入禁用名单。本文针对这些问题，以寻找价廉、易得而敏感的可替代酶源为目的，系统研究该酶对多种农药的敏感性和最低检测限，探索和建立小麦酯酶酶法农药残留快速检测方法，为该领域研究和应用做出探索性的尝试。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　小麦酯酶：黔麦16号 　　化学试剂：SDS（十二烷基硫酸钠）、a-萘酚、a-乙酸萘酯、固兰B盐、丙酮、无水乙醇、无水硫酸钠、灭线磷、杀扑磷、特丁硫磷、蝇毒磷、伏杀磷、马拉硫磷、三唑磷、治螟磷、丙溴磷、亚胺硫磷等农药标准品，含量均为100mg/mL，国家标准物质中心出品。 　　1.2 主要仪器设备 　　可见分光光度计、恒温水浴锅、离心机、旋转蒸发仪、 超声波清洗器 pH计、涡旋器、精密微量移液器。 　　1.3 溶液的配制 　　小麦酯酶的提取：取1g经过加工的小麦面粉，与蒸馏水按1：5（w/V，g/v）充分混合，在4℃的温度条件下以10000rpm的转速离心5min，过滤上清液后得到小麦酯酶原酶。 　　基液、显色液制配：要求现用现配，制配步骤是：在4ml的无水乙醇中加入5mg乙酸萘酯制成基液，然后在18ml蒸馏水中加入固蓝B盐10mg制成显色液，按1：9的比例将基液和显色液充分混合最终得到显色基质液。 　　不同浓度酶液制配：分别按照2.5%、5%、10%、20%的浓度配比稀释原酶液，就能得到不同浓度的酶溶液。 　　1.4 试验方法 　　酯酶活力最适pH值的测定：考察了pH4～8范围内 酯酶水解a-乙酸萘酯所测得的酶活（E）。当pH=6.5时，A值达到最大值，因此在这一酸性环境下检测酯酶活力最合适。本文也是用pH=6.5的缓冲液进行酯酶活力检测。 　　酶促反应最适温度的确定：在20℃～60℃温度条件下，每隔10%测定酯酶水解乙酸萘酯所测得的酶活（E）。当温度达到30℃时，A达到最大值。由此判定，30℃是检测酯酶活力的最佳温度条件。本实验也是在这一温度条件下进行的。 　　1.5 对不同农药的最低检测限确定 　　基于分光光度计的误差范围，将仪器能够测定的最小农药浓度作为检测限，再以仪器误差范围的2倍作为初定检测限，根据这一浓度