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基于多层膜敏感圆片光学式有机磷快速检测方法 　　摘 要 研究了基于多层膜敏感圆片的全固态有机磷光学检测方法。该方法基于胆碱酯酶抑制原理，利用紫色发光二极管光源和硅光电探测器实时测量在多层膜敏感圆片存在下待测溶液的吸光度。多层膜敏感圆片由载有胆碱酯酶和显色剂的上层亲水多孔膜片、载有底物的下层亲水多孔膜片及中间疏水性隔离膜组成。这种多层膜圆片制备简单，价格低廉, 易于保存，非常适合一次性使用。自主研制的检测装置小巧轻便，适合于对有机磷进行现场快速探测。使用时多层膜敏感圆片被置于自制装置的样品池中，定量加入待测水溶液，使圆片中的酶与有机磷反应一定时间，再定量加入待测液，使圆片完全浸润，同时记录待测液吸光度的变化曲线。对毒死蜱和敌百虫的探测结果表明，本方法的检出限为0.1 mg/L，每次测定约需10 min。 　　关键词 有机磷农药； 多层膜敏感圆片； 酶抑制法 　　 2010-08-13收稿；2010-10-16接受 　　本文系国家重点基础研究发展计划项目（973）（No.2009CB320300），中国科学院“百人计划”择优支持项目和集成光电子国家联合重点实验室开放课题资助 　　* E-mail: zhimei-qi@mail.ie.ac.cn 　　1 引 言 　　有机磷农药是人类最早合成而且至今仍在广泛使用的一类杀虫剂。自从20世纪30年代德国科学家Schradev G首次发现有机磷农药后［1］，由于它具有广谱、高效、品种多、降解快和残毒期短等优点，逐步取代了有机氯农药。在我国，有机磷杀虫剂的产量约占杀虫剂的70%［2］。随着人们对食品安全和环境保护的日益重视，有机磷污染问题备受关注。快速、准确、有效地检测有机磷具有重要意义。 　　检测有机磷的方法很多，如化学发光法［3,4］、免疫法［5～7］和电化学法［8～10］，这些方法尚处于实验室研发阶段，还未实用化。目前成熟的检测技术主要有气相色谱法［11］、液相色谱法［12,13］和色谱-质谱联用法［14,15］。虽然这些方法灵敏度高，准确可靠，但所用仪器体积庞大, 价格昂贵，操作复杂，样品需前处理，检测时间长且成本高，不适合现场快速检测。为了满足对有机磷现场快速检测的需求，小型便携式有机磷速测卡和速测仪相继问世［16～19］。二者都是基于有机磷对胆碱酯酶生物催化反应特有的抑制作用研制而成。有机磷速测卡便于存放，使用方便，但因其基于人眼目视进行比色测定，精度不高，准确性较差；有机磷速测仪是通过测量溶液的吸收光谱进行检测，准确性和测量精度比速测卡高，但在使用时需配制测试所需的多种溶液，操作繁琐耗时。 　　为了克服以上缺点，实现高灵敏度、高准确性、操作简单、易携带，适合于现场快速检测的有机磷传感器，本研究提出了全固态多层膜敏感圆片和准单色光吸收测量法，并利用毒死蜱和敌百虫对这种新的有机磷检测方法进行了实验论证，取得了较好的实验结果。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　紫色发光二极管（深圳市百优泰光电科技有限公司）；LS-1型卤钨灯、HR4000型CCD光谱分析仪（美国Ocean Optics公司）；硅光电二极管（北京汉岳恒光电子中心）；各种滤纸（迈博瑞生物膜技术公司）；检测装置（自制）。 　　丁酰胆碱酯酶（Butyrylcholinesterase from equine serum，BuChE，分子量440 kDa）、碘化硫代丁酰胆碱（S-Butytylthiocholine iodide，BTChI，分子量317.23 Da）、二硫代二硝基苯甲酸（5,5′-Dithiobis-2-nitrobenzoic acid， DTNB，分子量396.35 Da）、毒死蜱（Chlorpyriphos，分子量350.59 Da）、敌百虫（Trichlorfon，分子量257.44 Da），均购自美国Sigma-Aldrich公司；KH2PO4、Na2HPO4#8226;12H2O、无水乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。实验用水为去离子水，由Milli-Q纯净水机处理。 　　2.2 实验方法 　　2.2.1 溶液配制 磷酸盐缓冲液（PBS，pH=8）用0.1 mol/L KH2PO4和0.1 mol/L Na2HPO4#8226;12H2O配制。5 U/mL酶溶液，即BuChE溶液，使用PBS配制；10 mmol/L底物溶液，即BTChI溶液，用水配制；5 mmol/L显色剂溶液，即DTNB溶液，使用PBS配制；毒死蜱和敌百虫溶液，先用乙醇配制成25 g/L的标准液，置于4 ℃下， 测试当天再将此标准液用水稀释成不同浓度的溶液。 　　2.2.2 多层膜有机磷敏感圆片制备 　　所使用的多层膜有机磷敏感圆片由3层膜片重叠连接组成，如图1所示。最上层