基于网络药理学注射用血塞通抗视网膜静脉阻塞作用机制研究.docVIP

基于网络药理学注射用血塞通抗视网膜静脉阻塞作用机制研究 　　[摘要] 视网膜静脉阻塞（RVO）是常见的致盲性眼病，糖尿病、动脉粥样硬化等均能诱导RVO的发生，临床应用表明注射用血塞通对RVO具有良好的治疗效果，但是其作用机制尚不明确。该研究采用大鼠RVO模型，实验证实了血塞通对RVO损伤的保护作用，并通过文献检索建立血塞通抗RVO的成分-靶点网络，并选择性实验验证了血塞通对网络中VEGF，IL-1β和IL-6的作用，阐述了血塞通治疗RVO的多成分多靶点整合调节机制。研究表明注射用血塞通可能通过调控炎症反应、血管生成、细胞凋亡和凝血过程发挥其抗RVO的作用。 　　[关键词] 血塞通注射液；视网膜静脉阻塞；网络药理学；多成分多靶点；作用机制 　　视网膜静脉阻塞（retinal vein occlusion，RVO）是临床上常见的致盲性眼病，其病因和发病机制复杂，多种眼局部因素和全身因素均与其发病有关，糖尿病是最常见的全身因素之一[1]；注射用血塞通治疗RVO和糖尿病视网膜病变的的临床效果较好[2-3]，但是其实验研究很少，作用机制尚不明确。本研究在大鼠RVO模型上评价了注射用血塞通的治疗作用；在此基础上，采用网络药理学（network pharmacology）研究策略[4-6]，构建了血塞通治疗RVO的成分-靶点网络，并结合实验验证，阐述了血塞通抗RVO的“多成分、多靶点”整合调节机制，为注射用血塞通治疗视网膜疾病提供科学依据。 　　1 材料 　　1.1 动物 SD大鼠，SPF 级，雄性，220～260 g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可证号SCXK（京）2012-0001。 　　1.2 药物和试剂 注射用血塞通（冻干）（黑龙江珍宝岛药业股份有限公司，批号；葛根素注射液（山东鲁抗医药集团泰安制药厂，批号121201）；大鼠白介素-1β（IL-1β）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒（Bio-Swamp 公司，批号201306）；大鼠白介素-6（IL-6）ELISA试剂盒（Bio-Swamp 公司，批号201306）；大鼠血管内皮细胞生长因子（VEGF）ELISA试剂盒（Bio-Swamp 公司，批号201307）；四氯四碘荧光素二钠（虎红，上海试剂三厂，批；水合氯醛（天津市科密欧化学试剂有限公司，批。 　　1.3 仪器 冷光源激光发生器（天津航空航天8358 所研制）；病理图像采集与分析系统（北京航空航天大学图象中心产品）；Varioskan Flash全波长酶标仪（美国Themro Scientific）；LDF100C 多普勒流量计（美国Biopac system Inc）。 　　2 方法 　　2.1 模型制备 大鼠腹腔注射12%水合氯醛360 mg?kg-1麻醉后，左眼睑内滴注1%阿托品5 μL扩瞳，15 min后滴加2%普鲁卡因5 μL进行角膜麻醉。静脉注射虎红20 mg?kg-1，体积1 mL?kg-1，1 min后在手术前置镜与离体定位仪介导下进行冷激光照射视网膜静脉，制备RVO模型。照射位置距离视盘颞侧2个视盘直径距离，照射范围为直径1 mm内的视网膜静脉区域。冷激光参数：波长532 nm，光照直径1 mm，光强度50 mW，照射时间120 s。采用多普勒流量计测定每只大鼠对应眼球造模前基础血流量值，以及造模后1 h 流量值，以流量较基础值下降50%以上为栓塞造模成功。假手术组不注射虎红，只进行冷激光照射处理，其他操作与模型组相同。 　　2.2 分组及给药 大鼠随机分为6组，每组15 只，分别为假手术组、模型组、血塞通低、中、高剂量组（20，40，80 mg?kg-1）以及葛根素阳性药组（40 mg?kg-1），血塞通和葛根素40 mg?kg-1剂量相当于受试药的临床等效剂量。采用尾静脉缓慢注射给药的方式，给药体积均为4 mL?kg-1，每天1次，连续7 d。假手术组和模型组给予等体积生理盐水。 　　2.3 视网膜血流量测定 所有大鼠造模前（基础值）、造模后1 h，以及给药7 d 后，采用多普勒流量计测定对应眼球的视网膜栓塞区域的血流量。 　　2.4 组织病理学观察 实验结束后，每组5只动物取病变眼球，置4%甲醛固定，石蜡包埋，制作石蜡切片，沿眼球矢状面切片，厚度 5 μm，用苏木精-伊红（HE）染色，采用显微镜进行病理学观察。 　　2.5 血塞通成分-靶点网络构建 从PUBMED （http：///pubmed）文献数据库中检索与RVO相关的基因及血塞通主要成分（人参皂苷Rg1，Rb1，Rd，Re和三七皂苷R1）对这些基因的作用，建立血塞通的成分-靶点网络，分析血塞通抗RVO的可能靶点和作用机制。 　　2