复方地黄汤剂对痴呆小鼠脑神经元超微结构影响研究.docVIP

复方地黄汤剂对痴呆小鼠脑神经元超微结构影响研究 　　【摘 要】 目的：探讨复方地黄汤对老年痴呆的作用途径，分析探讨其疗效作用。方法：快速老化小鼠随机分为三组：实验组，治疗组，模型组。实验组给予复方地黄混浊液2ml/d 灌胃，治疗组给予脑复康水溶液2ml/天，500mg/kg体重(75片/300ml纯净水)，正常对照组采用健康昆明种小鼠，和模型组用生理盐水2ml/天灌胃， 以上均为每天分次给药，灌胃3周，每隔3天休息1天。3周后,各组小鼠进行行为学测试及电子显微镜观察神经元细胞形态的变化。结果 实验组和治疗组潜伏期明显缩短、过台次数增加,与模型组相比具有差异(P 0.05) 。超微结构复方地黄组海马神经元损伤轻微，大部分核膜清楚完整，细胞核染色质基本呈正常分布，核周间隙清晰可见。大部分细胞器清晰可见，神经纤维较丰富、排列有序，突触膜清晰，突触间隙不清，突触小泡较多。髓鞘较致密。结论：复方地黄能够提高快速老化小鼠的学习和记忆能力,在形态结构上能减少脑组织神经元的损伤。 　　【关键词】 复方地黄汤；学习记忆力；超微结构；神经元 　　 　　随着世界人口老龄化的发展，老年性痴呆（以阿尔茨海默病AD为主）成为老年人常见病 [1]。其病因复杂, 发病机制至今仍不清，目前国内外尚无特效方法和药物进行治疗，而祖国医学对于老年痴呆的治疗却积累了丰富的经验，属于肾精亏虚、痰浊阻窍、淤血阻滞，我们以“益肾健脾、祛痰清瘀”为基本治则[2-3]，复方地黄汤有益肾健脾、祛痰清瘀、滋阴养血的作用, 可以作用多系统、多环节，之前研究用此药物防治AD, 已取得较好的效果[4-5]。在前期研究工作的基础上,观察复方地黄汤对老年痴呆小鼠的作用效果,分析探讨复方地黄汤具体作用机制和疗效。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验动物：30只快速老化小鼠,9个月龄(体重25±2g) ,均是雄性,天津中医学院第一附属医院实验动物中心提供，10只健康昆明种小鼠10月龄,均是雄性,黑龙江中医药大学实验动物中心提供。 　　1.2 实验材料：复方地黄由熟地黄、龟板、山茱萸、丹参、何首乌、茯苓、泽泻、石菖蒲、远志等组成,汤剂由齐齐哈尔医学院药物研究所提供；吡拉西坦片（脑复康 ）国药准字 哈尔滨泰华药业股份有限公司； MORRIS水迷宫由中国医学科学院药物研究所提供； 　　1.3 动物分组及给药：快速老化小鼠随机分为三组,每组10只，分别是模型组、地黄组、治疗组。健康昆明种小鼠10只为空白对照组。地黄组用复方地黄混浊液2ml/ d (生药475mg/ ml) 灌胃；治疗组用脑复康水溶液2ml/天，500mg/kg体重(75片/300ml纯净水)，正常对照组采用健康昆明种小鼠，和模型组用生理盐水2ml/天灌胃， 以上均为每天分次给药，灌胃3周，每隔3天休息1天,3周后,进行各项实验。 　　1.4 Morris水迷宫实验：各组动物在给药3周后,依文献[6]方法进行Morris水迷宫训练7天,期间继续给药,训练7天完成后，测验小鼠寻找平台的潜伏期、跨越平台次数以及在原平台象限游泳距离与总游泳距离的比例。 　　1.5 电镜超微结构观察：取各组剩下小鼠鼠脑进行电镜标本制作：经取材，固定，包埋成块，修块、定位；超薄切片机切片，厚约500A；醋酸铀及构椽酸铅双染色；电镜下海马结构观察 　　1.6 统计学方法: 数据以均数±标准差( ±s)表示, 以SPSS 170.0 统计软件分析, 计量资料采用t检验分析, P0.05 表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 Morris 水迷宫实验各组小鼠寻找平台的潜伏期、跨越平台次数以及在原平台象限游泳距离与总游泳距离的比例,模型组与空白对照组比较,寻找平台的潜伏期长,差异显著（P 0.05) ，表明模型鼠空间探索能力下降。而实验组和治疗组潜伏期明显缩短、过台次数增加,与模型组相比具有差异(P 0.05) , 说明防治有效。各给药组与模型组比较,在原平台所在象限游泳距离与总游泳距离的比值更大,差异有显著(P 0.05) , 表明各给药组对原平台象限的记忆较模型组好,即对SAM - P/ 8 小鼠有增强记忆作用,见表。 　　Morris water maze test results in mice ( ±s) 　　group Number 　　(single) Latency Jump number t 4/ t总(%) 　　Experimental group 　　Treatment group 　　Model group 　　Control group 10 　　10 　　10 　　10 25.2±4.1* 　　27.8±3.6 　　32.4±3.5 　　37.6±3