5.层析-1幻灯片.pptVIP

应用：测定相对分子质量 标准曲线法 对于特定的测定系统，先以3个以上（越多越好）的已知分子量的标准蛋白（目前已有配套标准蛋白系列产品出售）过柱，测取各自的Ve值。以Ve作纵坐标，LogM作横坐标制做标准曲线。 在同一测定系统中测出未知物质的Ve值便可由标准曲线求得分子量。分子量在10 000～150 000之间的球形蛋白用此法测出的分子量误差在10％左右 Ve log M 标准曲线 凝胶过滤层析的特点 优点： 操作条件温和，样品回收率可接近100％，并且重复性高。 作为脱盐手段，与透析法相比速度快、精度高；与超滤法相比，蛋白活性收率高； 分离机理简单，操作参数少，容易规模放大 缺点： 分辨率不高，对于分子量相差不多的物质难以达到很好的分离 料液处理量小，并且样品粘度不宜太高 分离操作较慢，由于凝胶层析是以物质分子量的不同作为分离依据的，分子量的差异仅表现在流速的差异上，流速过快会降低分辨率 亲 和 层 析Affinity Chromatography 生物亲和作用 定义 很多生物物质，如酶和抗体等蛋白质都具有识别特定物质并与该物质的分子相结合的能力，这种识别并结合的能力具有排它性。生物分子间的这种特异性相互作用称为亲和作用。 亲和作用本质 亲和作用机理，特别是蛋白质亲和作用机理尚不清楚 蛋白质表面存在一些凹陷或凸起结构，如酶的结合位点通常位于酶蛋白的两个结构域或