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- 2018-09-07 发布于河南
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基因工程涉及的主要技术;基因工程;基因工程的操作流程;基因工程主要技术;一、DNA和RNA的提取和纯化;DNA提取的几种方法;基因组DNA-CTAB法原理(植物DNA提取经典方法); CTAB法流程图;质粒DNA-碱裂解法;对数期菌体; 蛋白质的去除:
酚/氯仿抽提
使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)
高盐洗涤
蛋白酶处理
多糖的去除:
高盐法:用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl,高盐可溶解多糖。
用多糖水解酶将多糖降解。
在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积),氯苯可以与多糖的羟基作用,从而去除多糖 。
用PEG8000代替乙醇沉淀DNA:在500μL DNA液中加入200μl 20% PEG8000 (含1.2 M NaCl) ,冰浴20min。
;多酚的去除:
在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等
加入易与酚类结合的试剂:如PVP、PEG(聚乙二醇),它们与酚类有较强的亲和力,可防止酚类与DNA的结合
盐离子的去除:
70%的乙醇洗涤
;总RNA的提取;二、凝胶电泳;常见
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