SUMO-1、SENP-1调控低氧诱导因子1-α在低氧性肺动脉高压发病中的作用内科学(呼吸)专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 2 PaO2 arterial partial pressure of oxygen 动脉血氧分压 PASP pulmonary artery systolic pressure 肺动脉收缩压 PBS phosphate buffered saline solution 磷酸盐缓冲液 PH pulmonary hypertension 肺动脉高压 PHDs hypoxia-inducibe factor prolyl hydroxylases 低氧诱导因子脯氨酰羟化 酶 Pvhl von Hippel–Lindau tumour suppressor protein 肿瘤抑制蛋白 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链反应 RT-PCR reverse transcription-polymerase chain reaction 逆转录聚合酶链反应 RV right ventricle 右室 RVHI right ventricular hypertrophy index 右室肥厚指数 SUMO small ubiquitin-related modifier 小泛素蛋白样修饰蛋白 S septum 室间隔 SABC streptavidin-biotin complex 链酶亲和素-生物素-过氧 化物酶复合物 SENP SUMO-specific proteases SUMO 特异性蛋白酶 siRNA small interfering ribonucleic acid 小干扰核糖核酸 TAD transactivation domain 转录激活区 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 WA wall area 管壁面积 WT wall thickness 管壁厚度 SUMO-1、SENP-1 调控低氧诱导因子 1-α 在低氧性肺动脉 高压发病中的作用 研究生：田华 导 师：戴爱国 教授 中文摘要 背景：缺氧诱导因子是细胞适应缺氧的关键转录因子，在缺氧性肺动脉高 压（HPH）的发生发展中起十分重要的作用，是使缺氧性肺血管重塑形成中调 控目标基因表达的―分子开关‖。低氧诱导因子1（HIF-1）是异二聚体的转录因 子，由氧敏感的α亚基（HIF-1α）和在核内稳定表达的β亚基（HIF-1β）组成。 HIF-1α是功能性亚基，调控100多种涉及低氧应激下细胞适应与存活的靶基因， 从而在低氧应答反应中起核心作用。最近几年发现的泛素样蛋白家族成员小泛 素蛋白样修饰蛋白-1(SUMO-1)能与HIF-1α共价结合，并对其进行翻译后修饰作 用，该过程称为SUMO化。SUMO化是一个可逆的动态过程，可被特异性蛋白 酶SENP-1将其从底物上去除，此过程称为去SUMO化。可逆的SUMO化修饰能 在低氧下调节HIF-1α的稳定性及转录活性。 目的：研究低氧性肺动脉高压（HPH）大鼠模型和患者肺动脉高压形成过 程中 SUMO-1、SENP-1、HIF-1α 及其靶基因血管内皮生长因子（VEGF）在肺 小动脉表达变化规律及相互关系，以及肺组织内 SUMO-1 对 HIF-1α 的 SUMO 化修饰情况，阐明 SUMO-1、SENP-1 调控 HIF-1α 的 SUMO 化修饰在 HPH 发 生、发展过程中的作用，为 HPH 发病机制提供新的理论依据。 方法：实验共分两部分。第一部分为动物实验部分：将 40 只成年雄性 Wistar 大鼠随机分为常氧对照组和低氧 3 d、7 d、14 d、21 d 组，每组 8 只，常 压 间 断 低 氧 复 制 HPH 大 鼠 模 型 。 用 右 心 导 管 法 测 定 大 鼠 平 均 肺 动 脉 压 （mPAP），称量法计算右心室肥大指数（RVHI），并进行 HPSR 指标观察。原 位杂交法检测肺小动脉 HIF-1α、VEGF mRNA 表达，免疫组织化学法检测其蛋 白水平；原位杂交、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测肺内 SUMO-1、 SENP-1 mRNA 表达水平及部位，免疫组织化学、Western blot 法检测其蛋白表达 水平及部位；免疫共沉淀法（CO-IP 法）检测 SUMO-1 对 HIF-1α 的 SUMO 化 修饰水平。第二部分为临床实验部分：将 36 名患者分