Toll样受体4对哮喘气道平滑肌细胞的合成分泌及增殖凋亡的作用研究-内科学专业论文.docxVIP

Toll样受体4对哮喘气道平滑肌细胞的合成分泌及增殖凋亡的作用研究-内科学专业论文.docx

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Toll样受体4对哮喘气道平滑肌细胞的合成分泌及增殖凋亡的作用研究-内科学专业论文

独 创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致 谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果, 也不包含未获得(注:如没有其他需要特别声明的,本栏可空) 或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同 志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示 谢意。 学位论文作者签名: 签字日期: 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论 文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件 和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学 位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国 学术期刊(光盘版)电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本 学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》、《中国 学位论文全文数据库》,并通过网络向社会公众提供信息服务。(保 密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名: 导师签字: 签字日期: 年 月 日 签字日期: 年 月 日 目录 中文摘要I ABSTRACTVII 符号说明XV 前言 1 Toll 样受体 4 对哮喘气道平滑肌细胞的合成分泌及增殖凋亡的作用研究..4 1 原哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)的分离、培养、鉴定及 siRNA-TLR4 的 制备及转染效率的检测 4 1.1 材料4 1.2 方法5 1.3 结果8 1.4 讨论10 2 Toll 样受体 4 对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)合成分泌及增殖凋亡 的影响 .12 2.1 TLR4 对哮喘大鼠 ASMCs 合成分泌及增殖凋亡的影响 12 2.1.1 材料12 2.1.2 方法13 2.1.3 结果16 2.1.4 讨论18 2.2 TLR4/NF-ΚB 在哮喘大鼠 ASMCs 中的表达及对 ASMCs 合成分泌及增殖 凋亡的影响21 2.2.1 材料21 2.2.2 方法22 2.2.3 结果25 2.2.4 讨论27 3 TLR4/NF-ΚB 在哮喘大鼠气道平滑肌的增殖凋亡中作用的研究 30 3.1 材料30 3.2 方法31 3.3 结果35 3.4 讨论40 参考文献43 附录 1 50 综述50 综述参考文献 58 附录 2 各部分彩图63 Toll 样受体 4 对哮喘气道平滑肌细胞的合成分 泌及增殖凋亡的作用研究 中文 摘要 研究背景和目的 支气管哮喘(简称哮喘)(bronchial asthma)是由多种细胞 (如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T 淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等) 和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。其重要的病理特征是慢性气道炎 症和气道重构。慢性炎症是以多细胞及细胞组分参与的免疫反应;气道重 构以气道平滑肌细胞(Airway smooth muscle cells, ASMCs)增生肥大、粘 液腺增生、基底膜增厚、粘膜化生和新生血管的增生等为特征;但目前气 道炎症和气道重构的机制未完全明确。近年的研究表明:气道平滑肌细胞 不仅作为靶细胞参与气道重构,还作为免疫细胞参与气道炎症反应,因此, 气道平滑肌细胞在哮喘的发生、发展过程中起着重要作用。 Toll 样受体(Toll like receptors, TLRs)是一个新发现的高度保守而古老 的天然免疫受体家族,它介导固有免疫和获得性免疫,可促使多种炎症因 子和细胞因子释放,引发和加重炎症反应。国外的研究报道 Toll 样受体 4 (Toll like receptors 4,TLR4)在气道平滑肌细胞有表达,同时也证实外周 血单核细胞与正常气道平滑肌细胞共同培养条件下,Toll 样受体 2(Toll like receptors 2,TLR2)及 TLR4 配体可诱导气道平滑肌细胞产生、释放细胞因 子、趋化因子,但国内未见 TLRs 与气道平滑肌细胞关系的研究报道;而且 国外的研究仅局限于正常气道平滑肌细胞表面 TLRs 激活与其分泌功能的 关系并未涉及哮喘状态下气道平滑肌细胞的 TLRs 的作用研究。 Sraat 等人证实了激活 TLR4 可以促进血管平滑肌细胞的增殖,气道平 滑肌细胞和血管平滑肌细胞都属于平滑肌细胞,在形态和功能上非常相似, 因此,我们推测哮喘气道炎症中的众多炎症介质、细胞因子可激活 ASMCs I II II 细胞膜上的 TLRs,TLRs 结合不同配体诱导哮喘气道平滑肌细胞产生炎症 反应、释放炎症介质及促进细胞增殖、抑制凋亡,从而在哮喘的发生、发 展过程中起重要作用。 NF-ΚB 是一种重要的、多向性的核转录因子,普遍存在于细胞质中的 快速反应转录因子,位于

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