Testin基因在非小细胞肺癌中抑癌机制的研究-内科学专业论文.docxVIP

5 5 本课题 Testin 基因在非小细胞肺癌中抑癌机制的研究，为安徽省教育厅自然科 学基金重点项目(KJ2014A158) 。 PAGE PAGE 1 Testin 基因在非小细胞肺癌中抑癌机制的研究 中文摘要 目的： 1.检测 Testin 基因在非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织的表达情况。 2.检测 Testin 基因在非小细胞肺癌细胞系及人支气管上皮细胞系的表达情况。 3.研究 Testin 基因在非小细胞肺癌组织中的表达与各临床病理参数之间的关 系。 4.通过构建针对 Testin 基因的过表达载体,利用慢病毒转染技术将 Testin 过表 达载体转染不同的肺癌细胞构建稳定 Testin 基因过表达肺癌细胞株,进而通过细胞 实验研究 Testin 基因对肺癌细胞增殖、侵袭、克隆、凋亡、转移等恶性生物学行 的影响。 方法： 1.检测 Testin 基因在非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织中的表达：收集并保存 非小细胞肺癌患者（N=30）的非小细胞肺癌组织及对照的癌旁正常组织，用半定 量 PCR、western blot 和免疫组化检测 Testin 在非小细胞肺癌组织中的表达；分析 Testin 基因表达与非小细胞肺癌患者临床病理的关系，为临床诊断、治疗提供理论 基础。 2.检测 Testin 基因在非小细胞肺癌细胞系（A549、LTEP-a-2、NCI-H1650）及 人支气管上皮细胞 16HBE 中表达差异，培养非小细胞肺癌细胞系，用半定量 PCR、 Western blot 检测 Testin 基因在非小细胞肺癌细胞系中的表达； 3.Testin 基因功能的初步研究：构建 Testin 真核慢病毒表达载体，转染到体外培 养的人非小细胞肺癌细胞系（A549、NCI-H1650）细胞中，通过嘌呤霉素筛选出 稳定表达克隆，以未转染组和转染空病毒组作对照，RT-PCR 及 Western b1ot 检测 Testin 在细胞内的表达情况。利用流式细胞术检测细胞凋亡、细胞克隆形成实验、 MTT 试剂盒检测细胞增殖、Transwell 法检测细胞侵袭。分析 Testin 对于肺癌细 胞恶性生物学功能的影响。 结果： 利用 RT-PCR 结果提示，发现 Testin 在肺癌细胞株 LTEP-a-2，NCI-H1650， A549 中的表达水平均低于 16HBE,差异有显著性（P＜0.01）。对比癌旁正常组织， 70%（21/30）的肺癌组织中 Testin mRNA 表达水平明显下调，有显著差异（P=0.000）。 Western blotting 检测结果提示 66%（20/30）的肺癌组织中 Testin 蛋白表达降低 （P=0.000）。免疫组化结果提示与癌旁正常组织对比，Testin 在肺癌组织中表达 显著下降（P＜0.05）。Testin 基因表达在患者的年龄、性别、肿瘤大小、吸烟、 病理类型等分组中均无相关性（P＞0.05）。Testin 基因表达与肺癌的分化程度、 淋巴结转移及临床分期相关，（r=0.546，r=0.602,r=0.520,P＜0.05）。分期越晚、 分化程度越低、淋巴结有转移，Testin 表达量越少。高分化、中分化、低分化三者 之间有显著性差异（P＜0.05）。构建 Testin 过表达慢病毒表达载体，分别在肺癌 细胞系 A549、 NCI-H1650 中转染 Testin 基因过表达慢病毒载体，经 RT-PCR 及 Western blotting 检测证实转染成功并筛选出稳定过表达 Testin 基因的肺癌细胞系， 且过表达细胞株生长状态表现好。MTT 结果显示在 Testin 表达量较少的 A549 及 NCI-H1650 肺癌细胞株中过表达 Testin 可导致肺癌细胞的增殖能力减弱（P＜ 0.05）。细胞克隆形成试验显示过表达 Testin 基因可导致细胞克隆形成能力减弱（P ＜0.05）。Transwell 试验结果显示过表达 Testin 基因可降低肺癌细胞侵袭性（P＜ 0.01）。流式细胞术检测凋亡试验显示过表达 Testin 基因可显著促进细胞凋亡（P ＜0.01）。 结论： Testin 在非小细胞肺癌中的表达量显著下降，而且与分化程度、淋巴结转移及 临床分期存在相关性。在体外实验中利用成功转染了 Testin 过表达载体的肺癌细胞 证明了 Testin 基因可以作为抑癌基因可以抑制肺癌细胞的增殖、侵袭、克隆形成 等肿瘤恶性生物学行为，并促进肺癌细胞凋亡。 关键词：Testin 基因；非小细胞肺癌；抑癌基因 Study on the Suppressive Mechanism of Testin Gene in Non-Small Cell Lung Cancer Abs