Tet蛋白的表达与CagA诱导胃癌相关性的研究-生物学专业论文.docxVIP

上海交通大学硕士毕业论文 上海交通大学硕士毕业论文 万方数据 万方数据 Tet 蛋白的表达与 CagA 诱导胃癌相关性的研究 摘 要 Tet 蛋白家族是 DNA 去甲基化过程中重要的修饰酶之一,可以催 化 5mC 氧化变为 5hmC。近几年的研究显示，Tet1 蛋白主要在干细胞 分化和遗传调控中发挥作用；Tet3 介导的 DNA 羟甲基化参与受精卵 父源基因的表观遗传信息重编程。另一方面，CagA 蛋白作为 H.pylori 的重要毒力因子之一，可促进寄主细胞的炎症发应，引起过度的氧化 应激反应，被认为是 H.pylori 致癌的最有力工具。由于目前 Tet 蛋白 与胃癌相关疾病的研究较少，本实验对胃黏膜中 Tet2 蛋白在幽门螺 旋杆菌细胞毒素相关基因 A 蛋白(Cytotoxin-associated protein A，CagA) 致癌过程中的作用进行了初次探讨。 利用 RT-PCR 检测胃粘膜细胞株 GES-1 和胃癌细胞株 TET mRNA 的表达水平，细胞免疫染色法、亚细胞分级分离和 Western Blotting 检 测 TET 蛋白的分布与定位。结果显示，Tet 蛋白家族 3 个成员在 GES-1 细胞和胃癌细胞中的定位、表达都有所变化，而且与肿瘤细胞的分化 程度有一定的关系。 将 pEGFP-CagA 通过脂质介导转染人胃黏膜上皮细胞（GES-1）， 用 200uM H2O2 处理 GES-1 细胞以建立相应的细胞氧化应激模型， 5 RT-PCR 检测 Tet2 mRNA 的表达水平；细胞免疫染色法、Western Blotting 检测 Tet2 蛋白的表达水平；流式细胞仪检测细胞中 ROS、 细胞周期的变化。结果显示 TET1\TET2 mRNA 在 GES-1 细胞的表达 低于胃癌细胞株、CagA-转染实验组细胞和氧化应激模型细胞，Tet 蛋白的结果也是如此，CagA -转染实验组细胞内 ROS 积累处于较高 水平，细胞的周期变化显著。 上述结果表明，Tet 蛋白的分布有明显的特异性，表达差异可能 会调控胃癌细胞的增殖、分化、凋亡等生命活动。细胞幽门螺旋杆菌 CagA 毒力因子可诱导细胞 ROS 水平升高和细胞周期的失衡，曾加了 DNA 损伤、复制错误及突变的可能性，进而可能引起 Tet 蛋白的高 表达，使 DNA 去甲基化与甲基化的平衡打破，使肿瘤细胞逃避了凋 亡机制，引起了胃癌的发生。 关键词： TET； CagA；5hmC；ROS；胃癌 6 RELATIONSHIP BETWEEN EXPRESSION OF TET PROTEINS AND CAGA-INDUCED GASTRIC CANCER ABSTRACT Tet Family Protein has been well-known as a dioxygenase modifying DNA by hydroxylating 5mC to5hmC, and the mechanism, signal pathway are deeply illustrated. Recently studies suggested that Tet1 proteins play an important role in ESCs differentiation and epigenetic regulation; Tet2 proteins are tightly associated with myeloid malignancies, and TET2 gene has been generally accepted as a tumor repressor; Tet3 –mediated DNA hydroxylation is involved in epigenetic reprogramming of the zygotic paternal. In addition, as a virus factor of H.pylori, CagA proteins enhance the inflammation in host cells resulting in more oxidative stress, which greatly induced the gastric carcinogenicity. We try to investigate the association between the aberrant expression of the Tet proteins and CagA of Helicobacter pylori(H.p) in the multiple process of gastric