Tf-USPIO纳米微粒通过神经干细胞配体介导吸收及其体外磁共振成像研究-外科学(神经外科学)专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 5 中文摘要 Tf-USPIO 纳米微粒通过神经干细胞配体介导吸收及其 体外磁共振成像研究 研究背景 神经干细胞（neural stem cell, NSC）是一种能够自我增殖、自我更新、并 能够分化成神经元和胶质细胞的干细胞，可以用作修复神经功能损伤的种子细胞， 但神经功能改善与干细胞移植之间的相关性还未完全明确。动物实验采用无创性 活体动态示踪技术有助于活体评价干细胞移植的疗效，是干细胞治疗走向临床前 必须解决的问题。磁共振分子影像学因其高组织空间分辨率、无硬性伪信号、无 辐射等优点而得到越来越多的应用。目前，超小顺磁性氧化铁（USPIO）是最常用 的体内外细胞磁共振标记物，其存在着明显的缺点就是随着细胞的传代而出现信 号递减，这限制了其不能长期动态的观察，但利用磁共振报告基因转染细胞方法 可以达到无创动态观察移植的细胞变化。 目的 1.合成 Tf-USPIO 纳米微粒以及建立稳定表达 TfR 的神经干细胞。 2.检测 TfR 神经干细胞吸收 Tf-USPIO 能否在磁共振上成像，为下一步动物活 体实验提供基础。 方法 1.利用慢病毒转染神经干细胞，通过流式细胞仪筛选出稳定表达 TfR 的神经干 细胞，运用 WB 检测其表达水平。将 Tf 与 USPIO 进行偶联，合成 Tf-USPIO 纳米微 粒，通过 DLS 方法测出 USPIO 和 Tf-USPIO 的直径分别为 36 ± 0.7 nm，43.5 ± 。 2.将 Tf-USPIO 与 USPIO 分别于 TfR 神经神经干细胞共培养，通过普鲁士蓝染 色、电镜以及 ICP 方法检测细胞中的铁离子含量，并用 CCK-8 试剂检测其对干细 胞的毒性，利用 7.0T 磁共振检测其成像结果。 结果 1.慢病毒成功的转染神经干细胞，通过流式细胞仪器筛选出稳定表达的神经干 细胞，并用 WB 证实了 TfR 的过表达；通过偶联的方法合成了稳定的 Tf-USPIO 微 粒。 2. Tf-USPIO 与 USPIO 分别与 TfR 神经干细胞孵育后，普鲁士蓝染色、电镜及 ICP 检测铁离子浓度证实 Tf-USPIO 比 USPIO 在 TfR 神经干细胞中吸收的明显增多 （P0.05）,CCK-8 结果显示二者对神经干细胞的毒性较小（P0.05）,磁共振成像 结果亦证实 Tf-USPIO 吸收量更多。 结论 1.成功的构建了 TfR 神经干细胞系，合成出稳定的 Tf-USPIO 纳米微粒。 Tf-USPIO 特异性的与 TfR 神经干细胞结合，并且可在磁共振上成像，可以 作为一种磁共振对比剂。 Tf-USPIO 在体外可以作为 TfR 神经干细胞的特异性示踪剂，为下一步活体 成像实验研究奠定基础。 关键词：神经干细胞/转铁蛋白受体/磁共振成像/超小顺磁性氧化铁 Tf-USPIO nanoparticles absorbed by ligand-mediated endocytosis in neural stem cells and detected by magnetic resonance imaging in vitro Abstract Background Neural stem cells (NSC) is a self-proliferation, self-renewal and has the ability to differentiation into neuronal and glial cell ,can be used to repair nerve damage as seed cells, but the correlation between nerve function improved and stem cell transplantion is not completely clear. Animal experiments in vivo using non-invasive in vivo dynamic tracing technology helps evaluate the efficacy of stem cell transplantation, must be resolved before stem cell therapy to clinical problems. Because of its advantage of high resolution ,with no rigid pseudo signal, no radiation, magnetic resonance molecular imaging get more and more applicatio