TSG抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡机制的初步研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 主要英文缩略词索引 缩略词 As 英文全称 atherosclerosis 中文译名 动脉粥样硬化 bp base pair 碱基对 cDNA complementary DNA 互补脱氧核糖核酸 DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 GAPDH glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 HUVECs human umbilical vein endothelial cells 人脐静脉内皮细胞 IκB inhibitor-kappaB kappaB 抑制蛋白 MTT methylthiazoletrazolium 四噻唑蓝 NF-κB nuclear transcription factor-kappaB 核转录因子 kappaB PAGE polyacrylamide gel electrophroesis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PMSF phenylmethylsulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 RNA ribonucleic acid 核糖核酸 rpm rotation per minute 每分钟转速 RT- RCR reverse transcription-polymerase chain reaction 逆转录-聚合酶链反应 TSG 2,3,5,4-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside 二苯乙烯苷 6-OHDA 6-hydroxydopamine 6-羟基多巴胺 TSG 抑制过氧化氢诱导内皮细胞凋亡机制的初步研究 研 究 生： 佟 丽 导 师： 田 英 教 授 龙石银 副教授 中文摘要 目的：研究二苯乙烯苷（TSG）抑制过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞 （HUVECs）凋亡的分子机制。 方法：体外培养 HUVECs，分为三组（对照组、H2O2 处理组、TSG 处理组）， 10μmol/L TSG 预处理 HUVECs 24h 后，300μmol/L H2O2 作用 HUVECs 24h， Hoechst33258 染色观察细胞凋亡形态，MTT 法检测细胞增殖率，流式细胞术检 测细胞凋亡率，RT-PCR 检测 NF-κB 与 IκB mRNA 表达，Western-blotting 检测 NF-κB p65、IκB、bcl-2、p53 蛋白表达。 结果： Hoechst33258 染色观察，与空白对照组比，H2O2 处理组凋亡细胞增多， TSG 处理组与 H2O2 处理组比凋亡细胞明显减少。MTT 结果显示，对照组、H2O2 处理组、TSG 处理组的增殖率分别为 100±4.2%、67.9±3.7%、77.8±3.1%，H2O2 降低了细胞增殖率，与空白对照组相比，差异有显著性（P＜0.01）；TSG 预处 理 HUVECs 24h 后，细胞增殖率升高，与 H2O2 组相比，差异有显著性（P＜0.01）。 流式细胞仪检测结果 显示，三组的凋亡率 分别为 2.0±0.2% 、 28.6±3.5% 、 14.9±3.2%，H2O2 组细胞凋亡率升高，与空白对照组相比，差异有显著性（P＜ 0.01）；TSG 预处理 HUVECs 24h 后，细胞凋亡率降低，与 H2O2 组相比，差异 有显著性（P＜0.01）。RT-PCR 和 Western-blotting 结果显示：H2O2 处理组 NF-κB mRNA 和蛋白表达升高，IκB mRNA 和蛋白表达降低，与空白对照组相比，差异 有显著性（P＜0.01），TSG 预处理使 NF-κB mRNA 和蛋白表达降低，IκB mRNA 和蛋白表达升高，与 H2O2 组相比，差异有显著性（P＜0.01）。H2O2 作用内皮细 胞后 p53 蛋白表达升高， bcl-2 蛋白表达降低；与 H2O2 组相比，TSG 预处理则 降低 p53 蛋白表达（P＜0.05），显著升高 bcl-2 蛋白表达（P＜0.01）。 结论： TSG 可能通过 NF-κB 信号通路抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞 凋亡。 关键词：二苯乙烯苷；人脐静脉内皮细胞；细胞凋亡；NF-κB 信号通路； bcl-2； p53 Study of the mechanism: TSG inhibited apoptosis of HUVECs induced by Hydrogen Peroxide Abstract Objective: To investigate the mechanism that