WD患者ATP7B基因突变热点及其与临床表型相关性研究-内科学专业论文.docxVIP

广东药学院硕士研究生学位论文 广东药学院硕士研究生学位论文 I I WD 患者 ATP7B 基因突变热点及其与临床表型相关性研究 课题背景: 研究生：黄叶青 导 师：洪铭范 教授 摘 要 肝豆状核变性（Hepatolenticular degeneration, HLD）又名Wilson 病（Wilson’s disease, WD），是一种常染色体隐性遗传性铜代谢障碍性疾病。临床主要表现为血清 铜蓝蛋白减低、肝硬化、进行性加重的锥体外系症状、角膜色素环、精神症状等。 WD基因存在高度的遗传异质性，且突变热区和高频突变位点具有区域、种族差异性。 目前，关于WD患者基因型和临床表型之间的关系存在很大的争议。本研究采用变性 高效液相色谱法（denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC）技术对 WD患者进行基因检测，并探讨基因型和表型之间的关系。 目的: 采用快速、高效的 DHPLC 对 WD 患者进行基因检测，寻找中国人 WD 患者新的 基因突变热区和高频突变位点，为建立可用于临床的快速、简便的基因诊断方法奠定 基础；并研究中国人 WD 患者基因高频突变位点的基因型、基因突变类型与临床表型 的关系。 方法: 1. 采用 DHPLC 检测来自 72 个不同家系的 75 例 WD 患者及其家属样本 171 例 的 ATP7B 基因，其中包括 144 例双亲和 27 例同胞。以 200 名正常健康人为对照。 2. 收集上述 WD 患者的临床资料、基因检测结果，以 ATP7B 基因的第 8、16 号 外显子 Arg778Leu 和 Ile1148Thr 突变作为基因型，以错义突变和非错义突变作为突变 类型，将患者的性别、发病年龄、病程、临床分型、首发症状及血清铜和血清铜蓝蛋 白检测结果等临床表型作为比较的指标，探讨中国人 WD 患者高频基因突变位点的基 因型与临床表型的关系。 结果: 1. 75 例 WD 患者 ATP7B 基因的 21 个外显子经 DHPLC 检测出 53 种不同的峰形 图。 II II 2. 经 DNA 测序证实，75 例 WD 患者共检出 13 种多态和 38 种突变，包括 24 种 错义突变、 5 种无义突变、3 种剪接突变、6 种移码突变。并首次报道 2 种新多态： 1839CT（Ile613Ile），2922GA (Trp974Trp)，及 10 种新突变(200 例正常对照未发现 相同形式的基因型)： 1875-1876dupAATT, 2120AG（Gln707Arg），2121+3AT， 2564CA(Ser855Tyr) ， 2620GC(Ala874Ser), 2761AC （ Ser921Arg ） , 3236GT （Cys1039Phe），3244-2AC, 3446GA（Gly1149Glu）, 3682AT(Arg1228stop)。 3. 75 例 WD 患者突变总的检出率为 90.67%(68/75),基因突变频率为 68.67% （103/150），Arg778Leu 突变的检出率为 42.67%（32/75），染色体突变频率为 22.67% （34/150），Ile1148Thr 突变的检出率为 18.67%（14/75），染色体突变频率为 9.3% （14/150），第 8、12、16 号外显子基因突变总的检出率为 48%（72/150）。 4. 75 例患者中，ATP7B 基因突变类型与患者的血清铜和血清铜蓝蛋白检测结果 无显著性差异（P0.05）；无 Arg778Leu 突变组的血清铜水平低于 Arg778Leu 杂合突 变组，有显著性差异（ P=0.012），无 Arg778Leu 突变组的血清铜水平低于 Arg778Leu 纯合突变组，有显著性差异（P=0.021）；Ile1148Thr 杂合突变组的血清铜蓝蛋白水平 高于无 Ile1148Thr 突变组，有极显著性差异（F=32.822，P=0.000）。 5. 75 例患者中，Ile1148Thr、Arg778Leu、ATP7B 基因突变类型与患者的性别、 发病年龄、病程、临床分型、首发症状等临床表型之间均无显著性差异（P0.05）。 结论: DHPLC 是一种可用于临床的快速、简便的基因诊断方法；Ile1148Thr 突变是中国 人 WD 患者 ATP7B 基因另一个高频突变热点；WD 患者基因型和临床表型之间的关 系非常复杂，仍需进一步研究。 关键词：Wilson 病 DHPLC ATP7B 基因 基因突变 临床表型 i i Study on the relationship of the ATP7B gene