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Src蛋白激酶抑制剂对5-氟尿嘧啶诱导的 结肠癌细胞凋亡的影响及意义-外科学(普外科)专业论文
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学位论文作者: 日 期: 年 月 日
摘
摘 要
Src 蛋白激酶抑制剂对 5-氟尿嘧啶诱导的结肠癌细胞
凋亡的影响及意义
研究生:叶志强 导 师:张谢夫
郑州大学第一附属医院普通外科 河南 郑州 450052
摘 要
背景与目的
据调查表明:结肠癌是世界第三常见的恶性肿瘤,其中一半以上发生在发 达国家;近年来,发展中国家结肠癌的发病率也正逐步上升。在我国, 结肠癌 发病率和死亡率均较前有较大升高,其中发病率已居我国恶性肿瘤的第四位, 死亡率居第五位, 已严重危害我国人民的生命健康。目前,结肠癌的基本治疗 方法是早期手术切除,中晚期患者在手术切除的基本上,术后辅以化疗的综合 性治疗方案。然而,我国结肠癌患者发现时大多已处于中晚期,肿瘤细胞局部 浸润和转移,已破坏了结肠有效的粘膜屏障功能及肿瘤范围不明显,单纯的手 术治疗无法切除所有肿瘤,容易复发和转移。而在手术的基础上,术前术后行 化疗治疗,不但可以降低肿瘤分期分级,为手术切除创造可行性,还降低了术 后复发和转移的风险,对患者无病生存期的延长有着重要意义。但临床数据表 明,对于该类患者手术切除癌肿后有很高的复发率,且对化疗有较高的耐药性, 特别是 5-氟尿嘧啶,许多患者最终因耐药而导致死亡。然而,5-氟尿嘧啶是结 肠癌化疗中的基本药物。因此,减少患者对 5-氟尿嘧啶耐药的发生,降低复发 和转移,对中晚期结肠癌的预后治疗效果的提高有着重要意义,是当前结肠癌 化疗研究的重要环节之一。
Src 蛋白是由原癌基因 src 编码,是位于细胞膜的非受体酪氨酸蛋白激酶
(nrPTKs)家族中的一员,与肿瘤的发生发展有着密切关系。据报道,Src 蛋 白在多种肿瘤中呈现出高表达,而在结肠癌患者中高表达率为 80%。因此,近
I
年来 Src 激酶抑制剂的研究已成为各种肿瘤治疗的热点。达沙替尼是一种二代
Src 激酶抑制剂,体外实验及动物实验研究发现其与奥沙利铂联用于结肠癌细胞 具有协同作用。目前有多项一期及二期临床试验测试达沙替尼与紫杉醇,卡培 他滨或奥沙利铂联用于乳腺癌,结肠癌等恶性肿瘤的治疗研究。Araujo, J.C.等 人的一项最新三期临床研究结果表明:达沙替尼和紫杉醇联用于前列腺癌治疗, 其疗效不改善转移性去势疗法抵抗的患者的生存期。但是,现在对于 src 激酶 抑制剂普遍的观点是:与传统的化疗药物联用能改善患者的治疗效果。然而, Carrato, A.等人做的另外一项类似的三期临床试验却得出了相反的结果:受体酪 氨酸激酶抑制剂舒尼替尼联用 FOLFIRI 方案不改善转移性结肠癌患者的生存 期,且联用导致更严重的安全问题。De Bouard, S.等人对于舒尼替尼的报道同 样可在细胞水平抑制 Src 激酶的活性。因此,结肠癌患者术后及化疗过程中 Src 激酶抑制剂与传统化疗药物联用的疗效尚不确定,有待进一步研究。
研究表明:多种化疗耐药的发生与细胞凋亡的降低有关。本文基于此,通 过细胞实验、MTS、Western blot 等方法检测达沙替尼和 5-氟尿嘧啶对结肠癌细 胞内 Src 蛋白的活性的影响;流式细胞仪、Western blot 等方法研究 5-氟尿嘧啶 与达沙替尼联用对比氟尿嘧啶单用对结肠癌细胞凋亡的影响;来进一步研究 src 激酶抑制剂与传统化疗药物联用的疗效及其影响。
一、达沙替尼和 5-氟尿嘧啶对结肠癌细胞内 Src 蛋白表达活性的影响 方法
1、 MTS 法检测达沙替尼、5-氟尿嘧啶对结肠癌细胞存活率的影响。
2、 Western blotting 检测 5-氟尿嘧啶对结肠癌细胞内 Src 蛋白活性的影响。 3、 Western blotting 检测达沙替尼对结肠癌细胞内 Src 蛋白活性的影响。 4、 Western blotting 检测达沙替尼
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