STIM1胞质区结构与功能的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docx

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 崔博洋 2015 年 6 月 3 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年) 摘要 摘要 摘要 钙离子信号转导在细胞调控的多种生理过程中都扮演着极其重要的作用。 胞内的多种代谢途径中都离不开钙信号的调控。由内质网钙库耗竭所诱发的钙 库操纵的钙离子内流途径（Store-operated calcium entry，简称 SOCE）是维持胞 内钙稳态的一个重要方式，它主要涉及两大蛋白家族：锚定在内质网膜或肌浆 网膜上的 STIM（Stromal interaction molecules）以及质膜上 Orai 蛋白家族所组成 的钙离子通道（Calcium-release activated calcium channels，简称 CRAC 通道）。 STIM1 蛋白能够感知内质网腔内钙离子浓度的变化，并将这种变化通过自身的 变构作用传递到胞质中，最终激活细胞膜上的 Orai1，打开 CRAC 通道，引起胞 外钙离子的内流，使得钙库重新充盈。 本实验室之前解析出来的 STIM1 C 端 SOAR 的晶体结构，提供了 STIM1 胞 质区行使激活功能的结构基础。此外，在解析出来的线虫 STIM1 C 端 CCR 的结 构中，我们发现了位于其 SOAR 结构域 N 端的一段短螺旋，猜测其可能参与维 持 STIM1 胞质区静息时的自抑制状态，因此将其命名为抑制性螺旋（Inhibitory helix, IH）。 本研究通过解析人源 STIM1 胞质区第一段含 IH 的 coiled-coil 结构域（简称 CC1-IH）的晶体结构，结合后续的结构分析、生物化学实验及细胞生物学功能 研究，辅以小角 X 射线散射（SAXS）的方法，最终描述出 STIM1 胞质区在处 于静息和激活生理状态时所各异的构象状态。我们得出结论：IH 促使 CC1-IH 二聚体的形成；同时，它有助于静息状态下 STIM1 胞质区自抑制构象的维持。 它作为一个开关，能够通过捕捉和释放 SOAR 结构域，从而抑制或激活 STIM1 分子的胞质区结构域；IH 对于 STIM1 胞质区的构象转变具有重要的调控作用。 这些都有助于进一步理解 SOCE 的分子机制。 此外，本文通过解析拟南芥 AtBAG5 的晶体结构并对其与底物蛋白 CaM 和 Hsp70 相互作用关系进行生化实验验证，辅以植物生理学的研究，发现其参与植 物衰老调控的重要生理意义；并首次提出了线粒体内的钙信号通过 AtBAG5 所 参与的分子伴侣系统对植物衰老过程进行调控的潜在分子机制。 关键词：SOCE，STIM1 胞质区，CC1-IH，自抑制，SAXS，AtBAG5 I Abstract Abstract Abstract Calcium signaling plays a critical role in regulating various physiological processes. Ca2+ signals can be generated in different pathways. Store-operated calcium entry (SOCE), which triggered by the calcium depletion in the endoplasmic reticulum (ER), is a principal cellular signaling pathway to maintain cellular Ca2+ homeostasis. There are two protein families involved in this signaling pathway: STIM (Stromal inte