Survivin反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞HSCT6凋亡的影响-消化内科专业论文.docxVIP

2目录 2 一、主要英文缩略语索引1 二、中文摘要2 三、英文摘要3 四、论文正文5-31 前言5 实验材料6 实验方法10 实验结果16 实验讨论23 实验结论27 参考文献28 五、综述32 六、硕士期间发表的文章41 七、致谢42 PAGE PAGE 1 主要英文缩略语索引 缩语 HSC-T6 英文全称 hepatic stellate cell-T6 中文译名 肝星状细胞 T6 细胞 PBS FBS DMSO HF ECM IAP ODN SODN ASODN mRNA PCR RT-PCR GAPDH phosphate buffer solution fetal bovine serum dinethylsulfoxide hepatic fibrosis extracellular matrix inhibitors apoptosis protein oligodeoxynucleotides sense oligodeoxynucleotides antisense oligodeoxynucleotides message ribonucleic acid polymerase chain reaction reverse transcription PCR glyceraldehyde-3-phosphate 磷酸盐缓冲液 胎牛血清 二甲基亚砜 肝纤维化 细胞外基质 凋亡蛋白抑制因子 寡核苷酸 正义寡核苷酸 反义寡核苷酸 信使核糖核酸 聚合酶链反应 逆转录 PCR 三磷酸甘油醛脱氢酶 SDS dehydrogenase sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 PAGE PI FCM polyacrylamide gelelectrophoresis propidium iodide flow cytometry 聚丙烯酰胺凝胶电泳 碘化丙啶 流式细胞仪 Survivin 反义寡核苷酸对大鼠肝星状细胞 HSC-T6 凋亡的影响 研究生 张秀梅 导 师 彭安邦 教授 中文摘要 目的：通过survivin反义寡核苷酸(Antisense Oligodeoxynucleotides,ASODN) 转染HSC-T6细胞株，研究其对HSC-T6细胞株凋亡的影响。 方法：实验分为空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组、ASODN组(400nmol/ L、 800nmol/L、1000nmol/L)。脂质体介导survivin寡核苷酸转染HSC-T6细胞24小时 后,倒置荧光显微镜下观察转染效率。Survivin寡核苷酸转染HSC-T6细胞48小时 后，通过RT-PCR、western-blotting检测survivin基因表达的改变,倒置显微镜 下观察细胞形态的改变，PI单染流式细胞仪测定细胞凋亡率。 结果：转染24小时后，于倒置荧光显微镜下观察发现：ODN各浓度组细胞内均可 见到清晰的绿色荧光，转染效率均达到80%；转染作用48小时后,RT-PCR及 werstern-blot结果显示：与空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组比较，ASODN 各浓度组survivin mRNA及蛋白表达量均低于各对照组（p0.01）；ASODN各浓度 组survivin mRNA及蛋白表达量组间比较，均有统计学意义（p0.01），空白组、 脂质体组、1000nmol/LSODN组组间比较无统计学差异（p0.05）。在倒置显微镜 下观察发现ASODN各浓度组细胞出现明显的凋亡现象；PI单染流式细胞仪检测显 示：与空白组、脂质体、1000nmol/LSODN组比较，ASODN各浓度组细胞凋亡率明 显提高（p0.05）；ASODN各浓度组凋亡率组间比较，均有统计学差异（p0.01）。 空白组、脂质体组、1000nmol/LSODN组组间比较无统计学差异（p0.05）。 结论：1、HSC-T6 细胞高表达 survivin； 2、Survivin ASODN 能抑制 survivin 基因的表达和诱导 HSC-T6 细胞的凋 亡。 关键词：Survivin；反义寡核苷酸；肝星状细胞；凋亡 本课题是湖南省科技厅资助研究项目，项目编号为（2007FJ3044） Effects of survivin antisense oligodeoxynucleotide on apoptosis of the hepatic stellate cell line HSC-T6 Abstract Objective:By transfecting survivin ASODN into HSC-T6 cell line, we explore the effect of survivin ASODN on