spink8基因对食管癌EC9706细胞增殖及 迁移的抑制作用-遗传学专业论文.docxVIP

spink8基因对食管癌EC9706细胞增殖及 迁移的抑制作用-遗传学专业论文.docx

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
spink8基因对食管癌EC9706细胞增殖及 迁移的抑制作用-遗传学专业论文

万方数据 万方数据 原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者: 日期: 年 月 日 摘 摘 要 spink8 基因对食管癌 EC9706 细胞增殖及迁移的抑制 作用 研究生:孙 艳 导 师:郑 红 教授 郑州大学基础医学院 医学遗传与细胞生物学系 河南 郑州 450001 摘 要 研究背景和目的 食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤,全世界每年约有 20 万人死于食 管癌,对人类的生命和健康造成极大威胁。食管癌的病因尚未完全明了,通过 多途径探索,发现其发病与遗传因素、亚硝胺慢性刺激、炎症及创伤、粮食和 蔬菜中的微量元素含量等相关,但其确切致病机制有待深入研究。EC9706 细胞 是来源于食管癌组织的细胞株,在体外以 EC9706 细胞为研究对象,对于探讨和 认识食管癌的生物学行为有重要的价值。 Kazal 型丝氨酸蛋白酶抑制剂家族(serine protease inhibitor kazal type, SPINK),成员包括 SPINK1~12 等多个亚族,该家族成员多与疾病和肿瘤相关, 如 spink1 与胰腺癌相关,spink2 与男性不育相关,spink7 为食管癌相关基因等。 spink7 已被证实为肿瘤抑制基因,具有调控细胞增殖、诱导凋亡及抑制肿瘤迁移 和侵袭等功能。以往的研究发现,食管组织内有 SPINK8 蛋白的内源性表达,同 时另一项全基因组比对结果显示,spink8 基因相对表达量在成人食管癌组织比正 常食管及癌旁组织明显减少。但有关 SPINK8 蛋白的功能研究国内外文献报道甚 少。spink8 与 spink7 具有同源性,且模拟三维结构相似,但两种蛋白的氨基酸序 列有部分差异,推测这两种蛋白特异性抑制的蛋白酶可能有所不同。 本研究将根据 NCBI 数据库记录的 spink8 cDNA 序列构建能够表达 shRNA 的重组质粒,并应用脂质体介导,将干扰重组质粒和过表达质粒分别转染 EC9706 I 细胞,观察 EC9706 细胞中 spink8 基因的表达情况,并讨论沉默 spink8 内源性 基因及过表达 SPINK8 蛋白对 EC9706 细胞增殖、迁移和克隆形成能力的影响。 实验将探索 spink8 是否属于抑癌基因,并初步阐述其作用方式,为食管癌的发 生发展提供可能得新的理论机制,以求为治疗提供新的作用靶点。 材料和方法 1.以 spink8 的 mRNA 已知序列为靶点,构建 pGenesil-SPINK8 重组质粒及 阴性对照质粒。 2. 重 组 干 扰 质 粒 pGenesil-SPINK8 、 阴 性 对 照 质 粒 、 重组 过 表 达 载体 pEGFP-C1-SPINK8 和空质粒 pEGFP-C1 分别转染 EC9706 细胞株,细胞分为 5 组,即未处理组、干扰组、阴性对照组、空载体组和过表达组,分别用半定量 RT-PCR 和 Western Blotting 检测对蛋白表达水平进行鉴定。 3.绘制 MTT 生长曲线检测转染后各实验组细胞的增殖能力。 4.克隆形成实验检测转染后各实验组的细胞克隆形成能力。 5.划痕愈合实验检测转染后各实验组细胞的体外迁移能力。 6.统计学分析:所有数据均由 SPSS17.0 软件处理,定量资料应用均数±标 准差(Mean±SD)表示;多组均数差异的比较采用单因素方差分析(ANOVA), 并用 LSD-t 法进行组间比较;以 α=0.05 为显著性检验水准。 结果 .成功构建 pGenesil - SPINK8 重组质粒,并且应用限制性内切酶 SalⅠ进行 消化,证实重组质粒能被切出长约 400 bp 的小带;测序结果与设计的完全相符。 . pGenesil - SPINK8 重组质粒转

您可能关注的文档

文档评论(0)

peili2018 + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档